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Notch信号通路在HBx致L02细胞恶性转化中作用机制的初步研究

作　者: 王凡
导　师: 程斌
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 肝细胞性肝癌 HBx Notch NICD Hes DAPT
分类号: R512.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的本研究旨在研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)在致人体非肿瘤系肝细胞L02中的恶性转化作用并初步探讨Notch信号通路在此过程中的作用及机制。方法通过载体将HBx全长基因转入L02细胞构建稳定表达HBx的细胞株L02/HBx,观测转染后细胞的增殖,细胞周期及凋亡的变化。再将其接种细胞于BALB/c裸鼠颈背部皮下,观测其成瘤效应。进一步通过qRT-PCR和Western blotting检测HBx对Notch信号通路重要分子Jagged1, Notch1, Notch1-IC及Hes1表达水平的影响。并应用γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路,通过检测阻断后Notch通路相关效应分子mRNA及蛋白表达水平的变化来判断阻断效率,并观测阻断后细胞的增殖,细胞周期及凋亡的变化。结果(1)与对照组L02细胞相比,转染HBx后的L02/HBx细胞增殖速度显著加快,凋亡率及G0/G1期细胞比例明显降低,S期细胞比例显著增高。(2)裸鼠成瘤实验发现,转染HBx后的L02/HBx细胞肿瘤增长速度及肿瘤重量显著高于对照组。(3)qRT-PCR及Western blotting检测表明, L02/HB x细胞的Notch1, Jagged1, Notch1-IC, Hes1在mRNA及蛋白表达水平上均显著高于L02细胞。*国家自然科学基金(编号: 30971352)(4)应用γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路后,L02/HBx细胞的存活率呈时间-剂量依赖性降低,细胞周期呈时间-剂量依赖性抑制,凋亡呈时间-剂量依赖性增加,而阻断Notch信号通路对正常的L02细胞生物学行为几乎没有影响。结论我们的研究表明,(1)HBx可显著促进人类非肿瘤肝细胞L02细胞株在体外和体内的生长,即HBx可诱导L02细胞发生恶性转化;(2)在这个过程中Notch信号通路的激活是不可缺少的:①在L02细胞中,HBx基因促进Notch信号通路主要分子Jagged-1,Notch-1,Notch1-IC,Hes-1在mRNA及蛋白水平上的表达,即在L02细胞中,异位表达的HBx可激活Notch信号通路。结合第一部分的研究结果,初步表明Notch信号通路的激活与HBx刺激L02细胞的增殖并促进其转化有关;②通过γ-secretase抑制剂DAPT阻断L02/HBx细胞的Notch信号通路后,HBx所介导的L02细胞恶性转化的生物学效应亦被阻断,且呈剂量-时间依赖性;③而DAPT阻断正常L02细胞的Notch信号通路对其生物学效应几乎没有影响。推测Notch信号通路在HBx致L02细胞恶性转化中起关键作用。

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
前言  11-13
第一部分  13-23
  1 材料和方法  13-16
  2 结果  16-21
  3 讨论  21-23
第二部分  23-39
  1 材料和方法  23-29
  2 结果  29-36
  3 讨论  36-39
参考文献  39-43
综述  43-53
  参考文献  50-53
附录实验中主要仪器设备及主要试剂配制  53-56
致谢  56

Notch信号通路在HBx致L02细胞恶性转化中作用机制的初步研究

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