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TLR4信号途径在川崎病血管损伤发生机制中的作用

作　者: 范晓蔚
导　师: 胡秀芬
学　校: 华中科技大学
专　业: 儿科
关键词: TLR4 川崎病丙种球蛋白
分类号: R725.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的观察川崎病(KD)急性期血清和丙种球蛋白对单核/巨噬细胞TLR4(Toll-like-receptor 4)信号转导途径分子基因表达的影响,以探讨TLR4信号途径在KD血管损伤过程中的作用及丙种球蛋白治疗KD可能的作用机制。方法1.实验分组:单核/巨噬细胞(THP1)按以下设计分组:⑴正常血清组:RPMI1640培养基+10%健康儿童血清;⑵K D血清组:①KD-CAL-血清组:RPMI1640培养基+10% KD-CAL-急性期血清;②KD-CAL+血清组:RPMI1640培养基+10% KD-CAL+急性期血清;⑶丙种球蛋白组:①KD-CAL-+丙种球蛋白组:RPMI1640培养基+10% KD-CAL-急性期血清+丙种球蛋白20mg/ml;②KD-CAL++丙种球蛋白组:RPMI1640培养基+10% KD-CAL+急性期血清+丙种球蛋白20mg/ml。2. THP-1单核源巨噬细胞培养:人单核巨噬细胞系(THP-1)由武汉大学典型物培养中心(CCTCC)提供,在含10%胎牛血清、0.5%二巯基乙醇的RPMI1640培养液中,37。C、5%CO2条件下静置培养。取对数生长期细胞,调整密度为1×109/L接种于6孔板,用160nmol/L PMA孵育THP-1细胞24小时,可见80%的细胞由悬浮状态变贴壁状态,且细胞形状由圆形变为梭形、椭圆形或不规则形,提示单核细胞已转化为巨噬细胞。按上述分成培养组(每组各6孔),在各组细胞培养板上加入上述各组条件培养基,继续培养24h后,用0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞备检。3.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法对单核/巨噬细胞TLR4 ,MyD88, TRAF6,CD14 mRNA进行扩增,产物琼脂糖凝胶中电泳后,用凝胶成像分析系统测定电泳条带密度值,以G3PDH为内参照,计算目的基因mRNA的相对含量,结果以目的基因与G3PDH条带密度的比值表示。结果1. KD血清组与正常血清组THP-1细胞TLR4信号途径分子基因表达的比较:KD血清组THP-1细胞TLR4, MyD88, TRAF6 mRNA的表达明显高于正常血清组[(1.27+0.17)%v(s0.26+0.11)%,(1.02+0.15)%v(s0.28+0.12)%,(0.98+0.09)% vs((0.22+0.10)%(P<0.01)],CD14 mRNA表达水平与正常血清组差异无统计学意义(P>0.05)。丙种球蛋白组与KD血清组相比,TLR4,MyD88,TRAF6 mRNA的表达呈不同程度下降。2. KD-CAL-血清组和KD-CAL+血清组比较,THP-1细胞TLR4,MyD88,TRAF6,CD14 mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论TLR4通路在川崎病的血管炎性损伤中发挥着重要作用,丙种球蛋白可能通过阻断TLR4通路而起到治疗川崎病的作用。

TLR4信号途径在川崎病血管损伤发生机制中的作用

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