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儿茶素对酸介导神经元损伤的保护作用及其机制研究

作　者: 栗建新
导　师: 张艳
学　校: 郑州大学
专　业: 药理学
关键词: 皮层神经元 (+)-儿茶素 酸敏感离子通道1a 酸环境 过氧化氢 丙二醛
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的缺血性脑血管疾病是严重危害人类健康的一类疾病,其死亡率及致残率均较高。目前临床缺乏有效的理想治疗药物,因此在缺血性脑血管疾病的治疗方面在开展溶栓治疗的同时积极寻找有效的脑保护药物具有重要的意义。大量研究证明:（+）-儿茶素有较强的清除自由基的作用,提高细胞内抗氧化酶的活力来抑制氧化损伤,从而对缺血性脑血管疾病有一定的治疗作用。（+）-儿茶素是儿茶素中的一种单体,儿茶素异构体及其衍生物的生物活性有许多共同之处,然而它们之间化学结构及立体构型的差异使其生物活性不尽相同。立体结构不同影响着化合物的生物活性特点。（+）-儿茶素表现出更强的抗氧化活性及更弱的细胞毒作用。近年来研究发现酸敏感离子通道（acid-sensing ion channels,ASICs）在缺血性脑损伤病理生理过程中发挥着重要的作用。越来越多的研究表明:ASICs参与了神经中枢多种生理、病理过程,包括:情绪、学习和记忆等脑高级功能、脑缺血损伤以及脑肿瘤等等。酸敏感离子通道是一类由氢离子（H+）激活的配体门控阳离子通道。但（+）-儿茶素能否通过影响脑神经元ASIC1a通道发挥脑保护作用,目前国内外尚未见报道。鉴于此,本试验从细胞及分子水平上,通过体外培养大鼠皮层神经元建立“酸环境”损伤模型,观察（+）-儿茶素对神经元的保护作用并进一步探讨其保护作用机制。方法大鼠皮层神经元原代培养,用阿糖胞苷抑制非神经元细胞的生长,神经元特异性烯醇化酶（NSE）鉴定并确定其纯度。取培养6d的细胞,随机分组为:①正常组;②酸环境损伤组;③（+）-儿茶素高、中、低剂量组（1.0mmol/L、0.5mmol/L、0.25mmol/L）。正常对照组常规换液一次,其余各组细胞除去原培养液,用D-Hank’s液洗2遍后,酸环境损伤组加入pH6.0的低糖DMEM液,在酸环境处理过程中,各给药组分别加入含不同剂量（+）-儿茶素低糖DMEM液,置培养箱中37℃、5%CO2、饱和湿度下培养6h,模拟由于体内缺血缺氧而形成的酸环境。酸环境处理6h后,倒置显微镜下进行一般形态学观察:比色法检测细胞的H2O2和MDA含量;RT—PCR法检测皮层神经元的酸敏感离子通道1a（ASIC1a）mRNA表达情况。结果（1）损伤组细胞培养液中H2O2含量（115.57±6.16mmol/L）明显增加,与正常组（73.15±2.81 mmol/L）相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;（+）-儿茶素高剂量组、中剂量组、低剂量组细胞培养液中H2O2含量（90.34±5.31mmol/L、100.50±4.08mmol/L、102.39±5.56mmol/L）减少,与损伤组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。与高剂量组相比,中、低剂量组H2O2含量增加,差异有统计学意义（P＜0.05）,中、低各剂量组之间H2O2含量差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）损伤组细胞培养液MDA含量（11.22±0.85nmol/ml）明显增加,与正常组（4.21±0.51 nmol/ml）相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;（+）-儿茶素高剂量组、中剂量组、低剂量组细胞培养液中MDA含量（6.19±0.45nmol/ml、7.53±0.97nmol/ml、9.06±0.77nmol/ml）减少,与损伤组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。高、中、低各剂量组之间比较,MDA含量逐渐增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（3）损伤组ASIC1amRNA的相对表达量（0.79±0.10）明显增高,与正常组（0.14±0.03）相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;（+）-儿茶素高剂量组、中剂量组、低剂量组ASIC1amRNA的相对表达量（0.26±0.05、0.31±0.07、0.55±0.12）降低,与损伤组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;与高、中剂量组相比,低剂量组ASIC1amRNA的相对表达量增高,差异有统计学意义（P＜0.05）:高、中剂量组之间ASIC1amRNA的相对表达量相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）（+）-儿茶素高、中、低各剂量均能明显改善酸损伤所致神经元的形态变化。结论（1）（+）-儿茶素能够减少酸介导发生氧化损伤时皮层神经元MDA、H2O2的生成,具有较强的抗氧化损伤作用。（2）（+）-儿茶素能降低酸介导皮层神经元ASIC1a mRNA的表达,从而发挥其脑保护作用。

全文目录


中文摘要  3-6
英文摘要  6-10
论文正文  10-36
  前言  10-12
  实验材料  12-15
  实验方法  15-21
  实验结果  21-25
  讨论  25-29
  结论  29-30
  附录 图片  30-32
  参考文献  32-36
综述 儿茶素药理活性的研究进展  36-49
  参考文献  43-49
中英文缩略语  49-50
致谢  50

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑血管疾病 > 急性脑血管疾病（中风）
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