学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

黄瓜芽黄突变相关基因的初步定位研究

作　者: 郭红梅
导　师: 高剑峰
学　校: 石河子大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 黄瓜 芽黄 hemA1 荧光原位杂交
分类号: S642.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 9次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：以新泰密刺黄瓜种子根尖作为材料,得到清晰稳定的黄瓜根尖中期染色体C显带和G显带,为更好的区分黄瓜染色体提供准确的依据,进而把与芽黄突变相关的基因初步定位到染色体上方法：(1)采用改良的中期染色体C显带方法和ASG法G显带制作方法,制作黄瓜中期染色体C显带和G显带。(2)用荧光实时定量PCR对HemA1基因片段在芽黄和正常黄瓜叶片中的差异表达进行了定量分析。(3)采用荧光原位杂交(FISH)法对HemA1基因片段进行了染色体定位。结果：(1)常规压片法和去壁低渗法得到的染色体浓缩程度较大,显示染色体带纹较少,单倍染色体带纹总数都为12条,而利用改良后的方法得到的染色体浓缩程度较小,显示的染色体条纹数也多,其单倍染色体条纹总数为30条,每条染色体都显示了明显的着丝粒带、中间带和末端带。将用ASG法得到的清晰、稳定的黄瓜中期G显带染色体通过显微观察、照片测量,对染色体进行了配对,并对带纹特征进行了分析。除了第一对染色体相对臂比大于1.70,属于sm型,其余六对都属于m型。单倍染色体具有G显带条纹数22条。(2)HemA1基因在黄瓜正常叶片中的相对表达量为1.00×103,在芽黄突变体叶片中的相对表达量为0.38×103。HemA1基因在芽黄突变体的表达下调。(3)通过荧光原位杂交技术对HemA1基因进行染色体定位,杂交信号较弱,背景颜色较深,染色体定位不准确。结论：(1)染色体显带的多少和带纹特征与染色体的浓缩程度有关,浓缩程度越大,显示条纹数越少。使用不同的药品对材料进行预处理,会使染色体停留在不同的时期,也就会使制片中染色体的浓缩程度也不同。另外,染色体的C显带和G显带之间并无明显的界限,因为染色体制片、显带过程中的每一个环节对染色体显带都很关键,每一个环节的细微变化都会使染色体显示不同的带纹,所以只要处理条件适合,可以得到染色体C带和G带的中间带。(2)HemAl基因在正常黄瓜叶片和芽黄突变体叶片中的表达量有明显差异,且表达量下调,说明HemA1基因与黄瓜的芽黄突变有很大关系。(3)荧光原位杂交过程中的制片的酶解、固定、脱水、探针的长度及标记以及染色等多个因素会严重影响杂交结果。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
英文缩写词表  8-11
第一章 文献综述  11-23
  1.1 叶色突变概述、研究背景和现状  11-14
    1.1.1 概述  11
    1.1.2 叶绿素合成的机制  11-12
    1.1.3 研究背景和现状  12-14
  1.2 基因表达量分析研究背景及现状  14-16
    1.2.1 基因表达分析方法  14-15
    1.2.2 实时荧光定量PCR  15-16
  1.3 基因染色体定位的研究背景、原理及操作程序  16-22
    1.3.1 研究进展  16-17
    1.3.2 染色体带型及显带技术  17-19
    1.3.3 荧光原位杂交的研究背景、原理及方法  19-22
  1.4 本实验的研究内容、实验目的和研究意义  22-23
    1.4.1 研究内容  22
    1.4.2 研究目的和意义  22-23
第二章 黄瓜中期染色体C显带  23-27
  2.1 实验材料和主要试剂  24-25
  2.2 实验方法  25
  2.3 实验结果  25-26
  2.4 讨论  26-27
  2.5 结论  27
第三章 黄瓜中期染色体G显带  27-31
  3.1 实验材料和主要试剂  28
  3.2 实验方法  28
  3.3 实验结果  28-29
  3.4 讨论  29-31
第四章 HEMA1基因片段在正常黄瓜及其突变体中的差异表达研究  31-40
  4.1 实验材料和主要试剂  31-32
  4.2 实验方法  32-35
  4.3 结果  35-36
    4.3.1 HemA1基因EST片段序列与基因库中的全cDNA序列比对结果  35
    4.3.2 RNA提取结果  35
    4.3.3 重组质粒检测结果  35
    4.3.4 RT-PCR结果  35-36
  4.4 结论与讨论  36-40
第五章 HEMA1基因在黄瓜染色体中的FISH定位分析  40-44
  5.1 实验材料  40
  5.2 实验方法  40-42
    5.2.1 黄瓜染色体制片  40
    5.2.2 探针制备  40-42
  5.3 结果与讨论  42-43
  5.4 展望  43-44
参考文献  44-49
致谢  49-50
作者简介  50-51
导师评阅表  51

相似论文

  1. FISH检测多粘类芽孢杆菌研究及其在猪粪有机肥和土壤中的应用,S144
  2. BABA诱导对黄瓜霜霉病抗性及其作用机理的研究,S436.421
  3. 黄瓜渐渗系抗南方根结线虫病遗传规律及分子标记研究,S436.421
  4. Bacillus subtilis SQR9的黄瓜促生和枯萎病生防效果及其作用机制研究,S436.421
  5. 黄瓜—酸黄瓜抗霜霉病渐渗系分子标记的筛选及细胞程序性死亡相关基因的表达分析,S436.421.11
  6. 荆州黑麦6R染色体抗白粉病基因的定位及分子标记,S512.1
  7. 黄瓜单性结实相关基因的分离、表达及SSR标记分析,S642.2
  8. 黄瓜苗期耐弱光性的QTL定位,S642.2
  9. 渗灌灌水方法和施氮量对保护地黄瓜的生长及氮肥利用率的影响,S642.2
  10. 高光谱图像技术诊断黄瓜病害方法的研究,S436.421
  11. 荧光原位杂交（FISH）与尿脱落细胞技术对尿路上皮肿瘤诊断及复发监测的临床应用研究（附43例报告）,R737.1
  12. 基于恒压式超高压技术的黄瓜汁杀菌与保鲜研究,TS255.5
  13. 黄瓜无侧枝基因nlb的定位及矮牵牛种质资源多样性分析,S642.2
  14. 新疆加工番茄抗黄瓜花叶病毒转基因技术的研究,Q943.2
  15. 黄瓜芽黄突变的分子细胞生物学特性初步研究,S642.2
  16. 多色荧光原位杂交在膀胱癌诊断及监测中的意义,R737.14
  17. 荧光原位杂交技术检测子宫颈上皮细胞hTERC基因扩增的临床应用研究,R737.33
  18. 黄瓜芽黄突变体的蛋白组学研究,S642.2
  19. 黄瓜芽黄突变相关基因CLpP的克隆及其功能分析,S642.2
  20. 黄瓜抗黑星病遗传规律研究及抗病相关基因的差异表达分析,S642.2

中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 瓜类 > 黄瓜
© 2012 www.xueweilunwen.com