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国内主要沿海城市零售贝类中副溶血性弧菌的定量风险评估

作　者: 曹慧慧
导　师: 周德庆
学　校: 中国海洋大学
专　业: 食品科学
关键词: 沿海城市零售贝类副溶血性弧菌定量风险评估
分类号: TS254.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 136次
引　用: 3次
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内容摘要

副溶血性弧菌(V.parahaemolyticus,Vp)是我国一种重要的食源性病原菌,主要引起急性肠胃炎,少数情况下诱发败血症。目前由Vp引起的食源性疾病呈逐年上升的趋势,特别是沿海地区,暴发频率和涉及人数明显高于其它地区。本论文建立了水产品中Vp的定量检测方法,并采用该方法对国内九个沿海城市零售贝类中Vp进行了全年监测,利用监测结果,结合膳食调查和相关变量数据,进行九个城市不同季节贝类中Vp的暴露评估,进一步根据微生物定量风险评估理论和技术,开展了九个城市零售贝类中Vp定量风险评估初步研究,得到了九个城市居民在不同季节生食贝类而引发Vp肠胃炎的概率分布。以Vp具有种属特异性的基因tlh和主要致病基因tdh为靶点,在本实验室前期建立的双重PCR方法的基础上,结合MPN法对贝类中的Vp进行定量。用PCR方法取代传统的生化鉴定,对PCR鉴定为tlh+的22株菌进行生化鉴定,结果表明PCR方法与传统的生化鉴定结果一致,PCR方法具有良好的特异性和准确性,可以取代繁琐的生化鉴定。我国是贝类生产大国,根据2007年渔业统计年鉴,选取了水产品产量较高省份的九个沿海城市,分别为青岛、烟台、日照、威海、连云港、大连、广州、厦门和舟山。从2008年10月至2009年9月每月定点采样,共采集样品675个,所采贝类主要包括蛤蜊、牡蛎、贻贝、缢蛏、毛蚶、扇贝等。通过监测得到九个城市零售贝类中Vp污染状况的背景资料,对其进行分析,初步得到Vp的分布规律。结果显示,Vp在贝类产品中普遍存在,九个城市零售贝类中Vp检出率范围为56%-73.3%。其中日照零售贝类中Vp的检出率为56%、大连为59.7%,其余七个城市贝类中Vp的检出率均高于60%,连云港零售贝类中Vp的检出率最高,达到73.3%。MPN定量结果表明,青岛、烟台和威海缢蛏中Vp的几何平均浓度明显高于其它几种贝类(P<0.05),几何平均浓度分别为86.6MPN/g、258.4MPN/g和494.6 MPN/g;广州贻贝中全部检出Vp(12/12),几何平均浓度(269.8MPN/g)明显高于其它几种贝类(P<0.05),表明今后对贝类中Vp的监测可有所侧重；日照、大连、连云港、厦门和舟山所采集的不同贝类,其阳性检出率和含菌量不存在显著差异(P>0.05)。按季节比较发现,不同城市春夏季零售贝类中Vp的污染状况不存在显著性差异,而秋冬季则差异显著,其中秋季舟山污染情况最严重,日照最轻；冬季以广州最严重,青岛最轻。九个城市零售贝类中Vp(tdh+)的平均检出率为0.96%。运用微生物风险评估理论,对九个沿海城市零售贝类中Vp进行定量风险评估。其中人群暴露评估的起点是零售,结合不同季节零售贝类中Vp污染分布、tdh+ Vp比率和初步的膳食调查数据推算出每餐致病性Vp摄入量的分布,并加入温度、零售贮藏时间、Vp的生长速率等因素对暴露评估模型进行了校正,用Crystal Ball软件获得了居民在不同季节消费贝类时每餐的致病性Vp的暴露量分布,结果表明居民每餐消费贝类中致病性Vp的平均暴露量在夏季最高,范围是3.26-5.32,其中大连最低,平均值为3.26、50百分位、90百分位与97.5百分位值分别为3.04、6.95和7.91,广州最高,平均值为5.32,50百分位、90百分位与97.5百分位值分别为5.15、9.19和10.04。平均暴露量最低的季节为冬季,其范围是0.01-2.26,其中广州最高,平均值为2.26,50百分位、90百分位与97.5百分位值分别为1.82、6.59和7.87；青岛最低,平均值为0.01,50百分位、90百分位与97.5百分位值分别为-0.02、1.65和2.01。通过零售贝类中Vp的定量风险评估初步得到了不同季节九个城市由于生食贝类导致的Vp疾病发生的概率分布,显示居民生食贝类导致肠胃炎发生的频率较高,其中青岛夏季Vp肠胃炎发生平均率为3.41E-03,50百分位、90百分位与97.5百分位值分别为2.31E-03、7.79E-01和9.18E-01,2004-2009年青岛夏季(7-9月)流行病学监测数据显示Vp引起肠胃炎的发病率为5.58E-5,低于本评估中的平均发生率,原因可能在于流行病学监测数据由于漏报导致数据偏低。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-13
0 前言  13-27
  0.1 风险评估的定义与原则  13-14
  0.2 食品微生物风险评估的类型  14
  0.3 微生物风险评估原则及步骤  14-17
    0.3.1 目的说明  14-15
    0.3.2 危害识别  15
    0.3.3 危害描述  15-16
    0.3.4 暴露评估  16-17
    0.3.5 风险性特征描述  17
  0.4 微生物风险评估的现状与应用  17-19
  0.5 对贝类进行副溶血性弧菌风险评估的意义  19
  0.6 副溶血性弧菌的生物学研究进展  19-20
  0.7 副溶血性弧菌的致病性研究  20-22
    0.7.1 副溶血性弧菌的溶血素  20-22
    0.7.2 尿素酶  22
    0.7.3 黏附因子  22
    0.7.4 侵袭力  22
  0.8 副溶血性弧菌检测方法的研究  22-27
    0.8.1 前增菌液的选择  23
    0.8.2 显色培养基的使用  23
    0.8.3 副溶血性弧菌快速检测方法研究  23-27
1 副溶血性弧菌快速定量检测方法建立  27-33
  1.1 实验材料  27
    1.1.1 实验菌株  27
    1.1.2 样品  27
  1.2 主要仪器和试剂  27-28
    1.2.1 仪器  27-28
    1.2.2 试剂  28
  1.3 实验方法  28-30
    1.3.1 样品的处理及增菌  28
    1.3.2 定量检测  28
    1.3.3 菌落PCR  28-29
    1.3.4 生化鉴定  29-30
  1.4 结果与讨论  30-31
    1.4.1 PCR特异性验证  30-31
    1.4.2 MPN-PCR定量检测  31
  1.5 小结  31-33
2 全国范围贝类产品中副溶血污染情况的调查  33-47
  2.1 样品的采集  33-34
    2.1.1 样品的来源  33
    2.1.2 采样地点的选取  33-34
    2.1.3 采样的种类和数量  34
  2.2 实验方法  34-35
    2.2.1 实验方法  34
    2.2.2 数据处理方法  34-35
  2.3 结果与讨论  35-45
    2.3.1 不同城市贝类中副溶血性弧菌的分布  35-41
    2.3.2 不同季节贝类中副溶血性弧菌污染状况  41-44
    2.3.3 零售贝类中thd~+VP污染状况  44-45
  2.4 小结  45-47
3 零售贝类中副溶血性弧菌暴露评估  47-63
  3.1 模型框架  47
  3.2 暴露评估中模型的确定  47-49
    3.2.1 零售中贝类中Vp的污染状况  47
    3.2.2 零售期间贮藏时间与温度  47-48
    3.2.3 零售阶段Vp的生长模型  48
    3.2.4 膳食调查数据  48
    3.2.5 消费阶段Vp的生长模型  48
    3.2.6 方法  48-49
  3.3 结果与讨论  49-62
    3.3.1 零售贝类中Vp污染状况的分布拟合  49-50
    3.3.2 致病性Vp所占比率  50
    3.3.3 零售期间贮藏温度与时间  50-51
    3.3.4 零售阶段Vp的生长模型  51
    3.3.5 膳食调查  51-52
    3.3.6 生食贝类导致的每餐致病性Vp暴露量及敏感性分析  52-62
  3.4 小结  62-63
4 九个城市零售贝类副溶血性弧菌的定量风险评估  63-73
  4.1 实验材料与方法  63-64
    4.1.1 风险评估框架  63
    4.1.2 数据和资料来源  63-64
  4.2 结果与讨论  64-70
    4.2.1 危害识别  64-65
    4.2.2 剂量-反应  65-67
    4.2.3 暴露评估  67
    4.2.4 风险描述  67-69
    4.2.5 控制措施的效果  69-70
  4.3 不确定性分析  70-71
    4.3.1 风险评估的确定性  70
    4.3.2 风险评估的不确定性  70-71
    4.3.3 风险管理措施  71
  4.4 小结  71-73
5 总结与展望  73-75
参考文献  75-85
致谢  85-86
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果  86

国内主要沿海城市零售贝类中副溶血性弧菌的定量风险评估

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