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T6-17细胞膜表面P185蛋白表达的研究及生物素—亲和素蛋白芯片检测方法的建立

作　者: 胡春芃
导　师: 宋礼华；徐振山
学　校: 安徽医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 免疫组化 P185蛋白卵巢癌生物素-亲和素 Cy3 抗体芯片
分类号: Q503
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:用免疫组化法检测T6-17细胞膜表面肿瘤标志物P185蛋白的表达量和分布情况,再从细胞上清中纯化P185蛋白作为阳性对照,将BAS和蛋白芯片技术结合,建立卵巢癌患者血清中肿瘤抗原P185蛋白的检测方法。方法:六孔板中内置多聚赖氨酸处理过的盖玻片,加入T6-17细胞培养制备成细胞爬片,4%甲醛固定,0.1% TritonX-100工作液处理增加通透性,PBS洗涤后用免疫组化SP法处理,DAB显色并与石蜡切片免疫组化结果比较。采用溴化氰活化的Sepharose 4B为基质,通过交联A18 mAb,用亲和层析的技术纯化p185蛋白作为阳性对照。自制单克隆抗体A18为一抗,生物素化单克隆抗体Bio-A21为二抗,金基底芯片为载体,荧光物质Cy3为标记,经抗原抗体反应后,GenePix4100A芯片扫描仪扫描读数,根据荧光值摸索最佳反应条件,确定P185蛋白在卵巢癌中的阳性率,并与BA-Elisa结果进行比较。结果:免疫组化结果显示P185蛋白主要分布于细胞膜上。从转基因细胞上清中成功获取肿瘤抗原P185蛋白。联合BAS的蛋白芯片的检测效率提高5倍左右,该检测方法的最佳反应条件是包被浓度6.25μg/ml,37°C孵育4h,样品缓冲液选择1%BSA-PBS。卵巢癌患者血清中P185阳性率为15.4%～18.5%,与BA-Elisa的结果一致。结论:证实T6-17细胞膜表面表达P185蛋白,初步建立了BAS的抗体芯片检测方法。证实P185蛋白阳性率与卵巢癌发展有关,具有广阔的临床应用前景。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-9
第一部分 T6-17 细胞膜表面 P185 蛋白表达的研究  9-22
  1. 引言  9-11
  2. 材料与方法  11-15
  3. 结果  15-16
  4. 讨论  16-21
  5. 结论  21-22
第二部分卵巢癌患者血清中 P185 蛋白芯片检测方法的建立  22-45
  1. 引言  22-24
  2. 材料与方法  24-32
  3. 结果  32-38
  4. 讨论  38-44
  5. 结论  44-45
参考文献  45-48
致谢  48-49
综述（抗体芯片技术在卵巢癌诊断中的应用进展）  49-57
简历  57

T6-17细胞膜表面P185蛋白表达的研究及生物素—亲和素蛋白芯片检测方法的建立

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