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三种多糖和冷冻平衡时间对牛精液冷冻效果影响的研究

作　者: 南向斌
导　师: 李青旺
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 牛精液冷冻保存冷冻保护剂抗氧化剂平衡时间
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

从上世纪80年代以来牛精液冷冻和人工授精技术得到了迅速的发展,并在实际应用中得到大力的推广。为了进一步提高牛精液冷冻-解冻效果,优化冷冻程序,保护和提高牛精子抗低温打击的能力,本试验以红景天多糖、褐藻胶、海藻糖作为冷冻保护剂和牛精液冷冻稀释平衡时间作为研究内容,以冷冻解冻后精子的活力、活率、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率作为评价指标,利用碘化丙啶(PI)、罗丹明123、低渗肿胀试验(HOST)和异硫氰酸荧光素连接的花生凝集素(PITC-PNA)分别检测了精子的活力、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率,并且探讨了红景天多糖、褐藻胶和海藻糖对牛精子冷冻解冻前后SOD、LDH和GOT酶活性的影响,得到如下结果:1在牛的精液冷冻过程中,在传统的稀释液TCG基础上,添加质量分数为6%的红景天多糖,6%的褐藻胶,4%的海藻糖均可提高牛精子冻后活力、活率、质膜完整率,顶体完整率都显著好于对照组,其中添加6%的褐藻胶的效果最佳,差异显著。冷冻保存效果依次为褐藻胶>红景天多糖>海藻糖。2将红景天多糖、褐藻胶和海藻糖以一定的比例两两搭配添加到牛精液冷冻的稀释液中,研究红景天多糖、褐藻胶和海藻糖对牛精液冷冻保护的互作效应,试验结果表明添加0.04mg/mL红景天多糖和0.4mg/mL褐藻胶处理组的冻后效果最佳,与对照组相比精液冻后活力、活率、质膜完整率、线粒体活性和顶替完整率都有显著提高,差异显著。3在精液冷冻过程中SOD的活性从鲜精到冷冻-解冻后逐渐降低,而LDH和GOT的活力的变化规律是从鲜精到冷冻-解冻后逐渐升高。分别添加0.06mg/mL的红景天多糖、0.6mg/mL的褐藻胶和0.4mg/mL的海藻糖的效果明显好于其它组和对照组,差异显著(P<0.05)。其中添加0.6mg/mL的褐藻胶效果最佳,SOD平衡后的活力比对照组提高7.13%,解冻后提高了27.81%;LDH平衡后降低了5.56%,解冻后降低了12.5%;GOT平衡后降低了4.14%,解冻后降低了11.07%。4为了克服夏季牛精液品质下降与冷冻效果降低,本试验将二次稀释平衡时间的第一次时间设定为:60min、90min、120min和150min;第二次时间设定为:30min、45min、60min和75min,以4h(第一阶段2h,第二阶段2h)做为对照进行交叉试验。结果发现第一次稀释平衡90min和第二次稀释平衡45min冷冻保存效果最佳。精子活力、活率、质膜完整率、线粒体完整率和顶体完整率均明显高于其它平衡时间组和对照组,分别提高了11.41%、10.96%、10.41%、10.81%和15.99%,差异显著。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-13
第一章家畜精液冷冻保存研究进展  13-16
  1.1 精液冷冻保存研究进展  13-14
  1.2 精液冷冻保存现状  14
  1.3 我国精液冷冻保存技术研究进展  14-16
第二章精液冷冻保存的机理和方法  16-21
  2.1 精液冷冻保存的原理  16
  2.2 精子冷冻损伤  16
    2.2.1 理性损伤  16
    2.2.2 化学性损伤  16
    2.2.3 氧化性损伤  16
  2.3 冷冻保存的方法  16-17
    2.3.1 细管法  16-17
    2.3.2 颗粒法  17
    2.3.3 铝箔袋法  17
    2.3.4 安瓿法  17
  2.4 稀释液的主要成分和生理作用  17-19
    2.4.1 稀释剂  17
    2.4.2 营养剂  17
    2.4.3 冷冻保护剂  17-18
    2.4.4 卵黄  18
    2.4.5 其它成分  18-19
  2.5 影响精液冷冻保存效果的因素  19-21
    2.5.1 稀释液  19
    2.5.2 降温速度  19-20
    2.5.3 种内个体差异  20-21
第三章精液品质评定方法和研究进展  21-28
  3.1 精液品质常规评价的方法  21
    3.1.1 密度的评定  21
    3.1.2 活力的评定  21
    3.1.3 活率的评定  21
  3.2 精子质量评价的新方法  21-27
    3.2.1 精子质膜完整性评定  21-23
    3.2.2 精子线粒体活性  23
    3.2.3 精子顶体完整性  23-24
    3.2.4 精子获能  24
    3.2.5 精子DNA 完整性的检测  24-26
    3.2.6 受精能力检测  26-27
  3.3 精液中酶类的检测  27-28
第四章三种糖对牛精液冷冻保护效果的研究  28-35
  4.1 材料与方法  28-30
    4.1.1 主要药品和试剂  28
    4.1.2 主要仪器  28
    4.1.3 基础稀释液的配制  28-29
    4.1.4 精液采集  29
    4.1.5 精液处理  29
    4.1.6 精子质量评价  29-30
    4.1.7 试验设计  30
    4.1.8 数据处理  30
  4.2 结果与分析  30-33
    4.2.1 三种糖对牛精子冷冻保存效果的影响  30-33
  4.3 讨论  33-34
  4.4 小结  34-35
第五章三种糖对牛精液冷效果的互作效应  35-40
  5.1 主要药品和试剂  35
  5.2 主要仪器  35
  5.3 基础稀释液的配制  35-36
    5.3.1 BTS 液的配制  35-36
    5.3.2 冷冻基础液TCG 的配制  36
    5.3.3 精子低渗液组成和配制  36
  5.4 试验设计  36
    5.4.1 红景天多糖和褐藻胶对牛精液冷冻效果的互作效应  36
    5.4.2 褐藻胶和海藻糖对牛精液冷冻效果的互作效应  36
    5.4.3 红景天多糖和海藻糖对牛精液冷冻效果的互作效应  36
  5.5 数据分析  36
  5.6 结果与分析  36-38
    5.6.1 红景天多糖和褐藻胶对牛精液冷冻效果的互作效应  36-37
    5.6.2 褐藻胶和藻糖对牛精液冷冻效果的互作效应  37-38
    5.6.3 海藻糖和红景天多糖对牛精液冷冻效果的互作效应  38
  5.7 讨论  38-39
    5.7.1 红景天多糖和褐藻胶对牛精液冷冻效果的互作效应  38
    5.7.2 褐藻胶和海藻糖对牛精液冷冻效果的互作效应  38-39
    5.7.3 红景天多糖和海藻糖对牛精液冷冻效果的互作效应  39
  5.8 小结  39-40
第六章三种多糖对牛精液冷冻前后SOD、LDH、GOT 酶活性变化影响的研究  40-46
  6.1 酶活性的测定  40-41
    6.1.1 SOD 活性的测定  40-41
    6.1.2 LDH 活性的测定  41
    6.1.3 GOT 活性的测定  41
  6.2 试验设计  41
    6.2.1 测定牛精子冷冻前后SOD、LDH、GOT 三种酶的活力变化  41
    6.2.2 三种冷冻保护剂对牛精子内SOD、LDH、GOT 三种酶活力的影响  41
  6.3 统计分析  41
  6.4 结果与分析  41-44
    6.4.1 精子内SOD、LDH、GOT 三种酶的活力的测定  41-43
    6.4.2 添加三种不同浓度的冷冻保护剂对牛精子内SOD、LDH、GOT 活力的影响  43-44
  6.5 讨论  44-45
    6.5.1 牛精子内SOD、LDH、GOT 三种酶活力的变化  44
    6.5.2 冷冻保护剂对牛精子内SOD、LDH、GOT 三种酶活力的影响  44-45
  6.6 小结  45-46
    6.6.1 测定牛精子处理过程中SOD、LDH、GOT 三种酶的活力变化  45
    6.6.2 冷冻保护剂对牛精子内SOD、LDH、GOT 三种酶活力的影响  45-46
第七章平衡时间对牛精液冷冻效果的影响  46-50
  7.1 材料与方法  46
    7.1.1 主要药品和试剂  46
    7.1.2 主要仪器  46
  7.2 基础稀释液的配制  46-47
    7.2.1 BTS 液的配制  46-47
    7.2.2 冷冻基础液TCG 的配制  47
    7.2.3 精子低渗液组成和配制  47
  7.3 精液采集  47
  7.4 试验设计  47
    7.4.1 不同平衡时间对牛精液冷冻效果的影响  47
  7.5 数据处理  47
  7.6 结果与分析  47-48
  7.7 讨论  48-49
  7.8 小结  49-50
结论  50
创新点  50-51
参考文献  51-61
致谢  61-62
作者简介  62

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