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苦参生物碱的绿色分离纯化技术研究及其MAT与OMT抗肺癌LETP-α-2活性对比探索

作　者: 陈景超
导　师: 秦学功
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 苦参生物碱 提取分离 绿色技术 抗肺癌活性 LETP-α-2
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 98次
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内容摘要


苦参(Sophora flavescens Ait.)为我国传统中药,主要有效成份为生物碱。其中苦参碱和氧化苦参碱药理活性广泛而显著,目前已经用于临床治疗乙型肝炎。然而,目前已见报道的提取工艺尚存在着耗能大、污染严重、效率低等缺陷。本文在综合分析了现有生物碱提取分离方法的基础上,开发了一套低成本、高效率、污染小的绿色提取分离技术,从提取、总生物碱纯化到主要三种单体生物碱的分离及苦参生物碱的定性定量检测进行了详细实验研究,主要研究内容如下：1、目标物含量检测是其提取分离纯化的前提,选定薄层色谱为本研究的检查方法,并在前人的基础上,采用响应面实验设计对其展开剂配比进行了优化,建立回归方程,并预测出能够得到最佳层析效果的展开剂配比：乙酸乙酯：无水乙醇：氨水=5.2：0.7：0.6。2、在苦参总碱的提取环节中,以渗漉法提取苦参总碱。经过方案论证,原料粒度、浸取液pH值、料液比、渗漉流速为主要影响因素,通过经验总结确定其所考查的范围。同样以响应面实验设计优化了苦参总生物碱的提取工艺。建立回归方程,并得出最优的提取条件：渗漉液的pH为1.53,药粉颗粒的目数为65-80,流速为3.39mL·min-1,收集5.86倍药物体积的渗漉液,提取率可达94%。3、在苦参生物碱的纯化过程中,选择以大孔吸附树脂法来纯化苦参生物碱,单因素优化了上柱前苦参渗漉液鞣质的去除,氧化苦参生物碱的还原,苦参生物碱吸附和解吸的工艺参数,对解吸液进行了除蛋白和除鞣质的处理。使总碱的纯度大幅度提高,纯度均在50%以上。4、在生物碱单体的分离过程中,借鉴薄层色谱的检测条件,以硅胶柱层析法进行单体生物碱的分离,最终得到了纯度均在90%以上的3种主要生物碱单体。最后,为拓宽其中苦参生物碱的应用领域,对比了MAT和OMT对于体外培养人肺癌LETP-a-2的影响,以期为肺癌的治疗及开发新药提供参考：以MTT法检测了浓度为0.5g·L-1、1.0g·L-1、2.0g·L-1、3.0g·L-1、4.0g·L-1的MAT和OMT对LETP-a-2作用24h,48h,72h,96h的抑制率。结果显示,MAT和OMT对LETP-a-2的抑制作用呈量—效关系和时—效关系,随着作用时间的延长和药物浓度的增加,LETP-a-2的存活率逐步降低。苦参碱对肺癌细胞LETP-a-2的抑制率均显著大于同浓度下的氧化苦参碱。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-9
前言  9-10
第一章 文献综述  10-21
  1.1 苦参生物碱  10
  1.2 苦参生物碱药理活性  10-13
  1.3 生物碱分析检测方法  13-15
  1.4 生物碱提取  15-17
  1.5 苦参生物碱的纯化  17-19
  1.6 苦参生物碱单碱的分离  19-21
第二章 薄层色谱检测条件的优化  21-26
  2.1 材料、试剂及仪器  21
  2.2 响应面实验设计与实验步骤  21-22
  2.3 结果与讨论  22-24
  2.4 小结  24-26
第三章 渗漉法提取苦参总碱的优化  26-34
  3.1 方案论证  26-27
  3.2 材料、试剂及仪器  27-28
  3.3 响应面实验设计与实验步骤  28
  3.4 结果与讨论  28-31
  3.5 小结  31-34
第四章 苦参生物碱的纯化  34-45
  4.1 材料、试剂及仪器  34
  4.2 苦参渗漉液上柱前的预处理  34-36
  4.3 树脂的筛选  36-38
  4.4 吸附与解吸的优化  38-42
  4.5 解吸液与浸膏的后处理  42-43
  4.6 实验验证  43-44
  4.7 小结  44-45
第五章 三种主要单碱的分离  45-48
  5.1 分离方法的选择  45
  5.2 材料、试剂及仪器  45
  5.3 实验步骤  45-46
  5.4 结果与讨论  46-47
  5.5 小结  47-48
第六章 MAT与OMT抗肺癌LETP-α-2活性比较  48-53
  6.1 材料、试剂及仪器  48
  6.2 实验步骤  48-49
  6.3 结果与讨论  49-52
  6.4 小结  52-53
第七章 结论  53-54
参考文献  54-58
致谢  58-59
附录  59-60
作者简历  60

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 有效成分的分离与提取
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