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瘦素受体在小尾寒羊体内的定位和表达研究

作　者: 肖欢
导　师: 崔亚利
学　校: 河北农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: OB-R 小尾寒羊免疫组化 Western Blot
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

瘦素受体是近些年发现的一种蛋白质激素,是瘦素在机体发挥作用的重要媒介,瘦素通过不同组织中的瘦素受体完成对动物生长发育的多种调控。本实验选取发育正常且健康状况良好的雌性小尾寒羊6只,应用常规HE染色和免疫组织化学染色方法观察瘦素受体在小尾寒羊神经内分泌系统(下丘脑、脑垂体)、消化系统(皱胃、十二指肠)和生殖系统(子宫、卵巢)中6个器官的的表达和定位;并通过Western blot实验检测各组织瘦素受体蛋白的表达情况及异构体类型。结果发现:(1)HE染色各组织结构清晰,细胞形态完整;(2)免疫组织化学染色发现:各组织内均有瘦素受体蛋白阳性表达细胞,棕色颗粒多位于细胞的胞浆中。①下丘脑含有大量OB-R表达细胞,阳性神经元细胞多呈梭形,圆形或不规则星形,细胞核位于中间或偏向一侧;②脑垂体内OB-R阳性细胞主要位于腺垂体的远侧部,着色细胞多为嗜色细胞;③皱胃胃壁的肌层和浆膜层未见明显的OB-R蛋白阳性表达,在黏膜层胃底腺的底部和体部,可见多量OB-R阳性表达细胞,阳性细胞体积较大,圆形,细胞核较大呈圆形或锥体形;④十二指肠只在黏膜上皮细胞和固有层的肠腺的柱状细胞中可见大量阳性表达细胞,杯状细胞呈阴性表达;⑤不同发育阶段卵泡内的卵母细胞质均有OB-R蛋白质表达。原始卵泡的卵泡细胞内没有OB-R蛋白质的表达,随着卵泡的发育,初级和次级卵泡的颗粒层细胞内出现OB-R阳性细胞;⑥子宫黏膜的固有膜浅层和深层的子宫腺的柱状上皮细胞中见OB-R阳性表达细胞,在柱状细胞游离端胞质内可见大量棕色颗粒。(3)Western blot实验发现各组织OB-R蛋白表达相对集中,在120KDa、110KDa、98KDa处均有深浅不等的3条蛋白条带的表达。①在神经内分泌系统中,下丘脑和垂体的三条蛋白表达带基本相同,120KDa的蛋白质条带表达较弱,在这两种组织内的表达强度相似;三条带中,110KDa的蛋白质条带表达最强,98KDa蛋白质表达最弱;②在消化系统中,皱胃胃壁在120KDa、110KDa处均有明显的OB-R蛋白条带的表达,在98KDa能看到一条较淡的蛋白条带。十二指肠在110KDa、98KDa处OB-R蛋白表达较强烈,在120KDa处则表达很弱。皱胃在120KDa处蛋白表达最强烈。十二指肠在110KDa处蛋白表达最高;③在生殖系统中,子宫在110KDa处OB-R蛋白表达很强烈,而在120KDa、98KDa处表达相对较弱;卵巢在120KDa、110KDa、98KDa处均有较强烈的OB-R蛋白表达。瘦素受体在小尾寒羊体内多组织的大量表达,说明瘦素及其受体在小尾寒羊消化和繁殖功能中均具有重要作用。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-10
1 引言  10-20
2 材料与方法  20-28
  2.1 实验材料  20
  2.2 主要材料与仪器  20-21
    2.2.1 主要试剂及药品  20
    2.2.2 主要仪器设备  20-21
  2.3 实验方法  21-28
    2.3.1 溶液的配制  21-23
    2.3.2 常规HE 染色试验  23-24
    2.3.3 免疫组织化学染色试验  24
    2.3.4 Western Bolt 检测  24-26
    2.3.5 结果判断  26-28
3 结果与分析  28-37
  3.1 HE 染色结果  28
  3.2 各组织免疫组织化学染色结果  28-34
    3.2.1 对照试验  28-29
    3.2.2 下丘脑 0B-R 蛋白免疫组化染色结果  29-30
    3.2.3 脑垂体OB-R 蛋白免疫组化染色结果  30
    3.2.4 皱胃 OB-R 蛋白免疫组化染色结果  30-31
    3.2.5 十二指肠 OB-R 蛋白免疫组化染色结果  31-32
    3.2.6 卵巢OB-R 蛋白免疫组化染色结果  32-33
    3.2.7 子宫OB-R 蛋白免疫组化染色结果  33-34
  3.3 Wsstern Blot 实验结果  34-37
4 讨论  37-43
5 结论  43-44
参考文献  44-50
在读期间发表的学术论文  50-51
作者简历  51-52
致谢  52-53

瘦素受体在小尾寒羊体内的定位和表达研究

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