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EIAV减毒疫苗诱导体液免疫反应时相及膜抗原改造研究

作　者: 阳凯
导　师: 张晓燕；邵一鸣
学　校: 中国疾病预防控制中心
专　业: 免疫学
关键词: EIAV 体液免疫糖基化减毒疫苗
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

马传染性贫血病毒(EIAV)是与HIV同科同属的马属动物慢病毒,其病毒形态、基因组结构,病毒编码蛋白的结构和功能及抗原特性等方面与HIV极为相似。中国EIAV减毒活疫苗是目前世界上唯一大规模应用的慢病毒疫苗。因此深入探索该疫苗的免疫保护机制将为HIV疫苗的研制提供有益的借鉴。本课题利用研究室前期工作中构建的EIAV感染性分子克隆pLGFD3制备减毒疫苗pLGFD3-V,免疫动物后,定期采集血样本,通过ELISA方法检测各个时点血清中针对EIAV膜蛋白(Env)Gp90,和基质蛋白p26结合抗体的滴度;同时,采用细胞蚀斑染色方法检测中和抗体的滴度,分析EIAV减毒疫苗诱导的体液免疫反应的成熟时相。结果显示,EIAV减毒疫苗免疫马后,针对Env Gp90和Gag p26蛋白均产生了特异性的体液免疫反应,Gp90结合抗体在2个半月左右达峰值(1:320,1:320),随后尽管有轻微的波动,但一直维持在较高的水平直至免疫后5至6个月,随后开始轻微回落,在免疫后32个月时仍能检测到稳定存在。而p26结合抗体则存续时间较短,在免疫后1-2个月达峰值(1:320,1:40),随后呈明显回落,在4个月时回落至检测水平以下。EIAV减毒疫苗诱导的特异性中和抗体的水平同样在2个月左右达峰值(约1:2800—1:3000),在整个观测期内持续稳定存在。上述结果证实,EIAV减毒疫苗免疫后,能诱导产生特异性的Gp90,p26结合抗体以及中和抗体,而且GpgO特异性结合抗体和中和抗体可持续稳定存在。为了增强减毒疫苗诱导中和抗体的免疫原性,我们尝试对env基因V3,V4区以及连接片层上糖基化位点进行了缺失型改造,探索上述糖基化位点的缺失对体液免疫反应的影响。首先构建了上述Env区糖基化位点缺失的的DNA疫苗(pDRVI—none)和痘苗载体疫苗(rTTV—none),以减毒疫苗膜蛋白的DNA疫苗(pDRVI—env)及痘苗载体活疫苗(rTTV—env),以及空白的DNA疫苗/痘苗病毒载体(pDRVI—sv1.0/rTTV—7521)为对照,采用DNA初免/痘苗加强的策略,分别免疫小鼠。分组如下(1)pDRVI—env/rTTV—env,(2)pDRVI—none/rTTV—none,(3)pDRVI—sv1.0/rTTV—7521和(4)生理盐水。免疫2个月后,采用与上述相同的实验方法,检测各组基因工程疫苗诱导的针对gp90的结合抗体和中和抗体水平。结果显示,和减毒疫苗膜蛋白未经改造组相比,糖基化位点的缺失对膜蛋白诱导结合抗体的能力没有形成显著的差异,但降低了膜蛋白诱导中和抗体的频率和中和滴度。说明减毒疫苗膜蛋白在V3,V4区所分别保留的199位,217位糖基化位点对于有效中和抗体的诱导是必须的。今后应该探索新的策略,增强疫苗诱导体液免疫反应的免疫原性。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
引言  8-18
实验材料  18-22
第一部分 EIAV 减毒疫苗克隆株诱导体液免疫反应的时相研究  22-27
  实验方法  22-24
  实验结果  24-27
第二部分膜蛋白抗原糖基化位点缺失对体液免疫反应的影响  27-35
  实验方法  27-33
  实验结果  33-35
讨论  35-38
结论  38-39
参考文献  39-42
论文发表情况  42-43
致谢  43

EIAV减毒疫苗诱导体液免疫反应时相及膜抗原改造研究

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