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益骨颗粒治疗骨质疏松的药效及机理研究

作　者: 张颖
导　师: 许惠琴
学　校: 南京中医药大学
专　业: 药理学
关键词: 益骨颗粒镇痛抗炎小鼠肠系膜微循环去卵巢骨密度骨代谢血清药理学成骨细胞增殖
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

第一章镇痛、抗炎作用目的:观察益骨颗粒的镇痛、抗炎作用。方法:镇痛实验小鼠随机分为5组。（1）空白对照组:蒸馏水;（2）益骨颗粒低剂量组:8g生药/kg;（3）益骨颗粒中剂量组:16g生药/kg;（4）益骨颗粒高剂量组:32g生药/kg;（5）骨松宝组:2g/kg。各组均灌胃给药1次,给药体积为0.2ml/10g。采用热板法和醋酸扭体法观察益骨颗粒的镇痛作用。抗炎作用采用三种方法——对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响、对巴豆油混合致炎剂所致小鼠耳廓肿胀的影响、对大鼠塑料环肉芽肿影响试验。前两个抗炎实验和镇痛实验一样分组给药,第三个实验的大鼠随机分为5组。（1）空白对照组:蒸馏水;（2）益骨颗粒低剂量组:4g生药/kg;（3）益骨颗粒中剂量组:8g生药/kg;（4）益骨颗粒高剂量组:16g生药/kg;（5）骨松宝组:1g/kg。造模后第10天开始灌胃给药,给药体积为1ml/100g,每天1次,连续给药14天。结果:益骨颗粒各剂量组在给药后各时间点痛阈值均高于空白对照组,尤其在给药后1h镇痛效果最明显。益骨颗粒中、高剂量组能明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数,与空白对照组比较,有显著性差异（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增高（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒各个剂量组均能减轻小鼠耳廓肿胀度,与空白对照组相比,有显著性差异（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒各个剂量组肉芽肿净重,与空白对照组相比,均有显著性差异（P＜0.05,0.01）。结论:益骨颗粒有一定的镇痛、抗炎作用。第二章益骨颗粒对小鼠肠系膜微循环的影响目的:观察益骨颗粒对小鼠肠系膜微循环的影响。方法:昆明种小鼠随机分为5组。（1）空白对照组:蒸馏水;（2）骨松宝组（GSB）:2g/kg;（3）益骨颗粒低剂量组（BBG-L）:8g生药/kg;（4）益骨颗粒中剂量组（BBG-M）:16g生药/kg;（5）益骨颗粒高剂量组（BBG-H）:32g生药/kg。各组均灌胃,给药体积12ml/kg,连续给药3天。实验前禁食不禁水12小时,灌胃给药后,戊巴比妥钠40mg/kg,腹腔注射麻醉,背位固定,右下腹部剪毛,剪开约3cm切口,拉出一段肠袢,平铺于有机玻璃灌流小池上,大头针固定,30℃缓慢灌流,放大镜放大20倍观察微血管,固定视野,并用高压汞灯作为冷光源。分离股静脉供给药用,静脉注射10%高分子右旋糖酐6ml/kg,10分钟和30分钟分别观察并计录微循环障碍指标。观察固定区域内固定面积毛细血管与四周边界的交叉点数目、血流速度、毛细血管血流状态。结果:益骨颗粒三个剂量组毛细血管网交叉点数均增加;血液速度增快,与空白对照组相比,均有显著性差异（P＜0.05）;血流状态积分下降。结论:益骨颗粒有促进毛细血管开放作用,可以明显增加毛细血管血流速度和改善毛细血管内血流状态。第三章益骨颗粒对实验性骨质疏松大鼠模型的影响目的:观察益骨颗粒对实验性骨质疏松的影响。方法:雌性24周龄SD大鼠90只,随机分为6组。其中空白对照组大鼠不作处理,其余大鼠以3%戊巴比妥钠溶液1ml/kg的剂量腹腔注射麻醉,由背侧入,完整摘除双侧卵巢,止血缝合。空白对照组只切除少量脂肪组织。术后肌注青霉素生理盐水2万u/kg,连用3天。饲养一周后,将去卵巢大鼠随机分为5组,加上空白对照组总共6组:（1）空白对照组:给予等量的蒸馏水;（2）模型组:给予等量的蒸馏水;（3）益骨颗粒低剂量组（BBG-L）:给予益骨颗粒4g生药/kg;（4）益骨颗粒中剂量组（BBG-M）:给予益骨颗粒8g生药/kg;（5）益骨颗粒高剂量组（BBG-H）:给予益骨颗粒16g生药/kg;（6）阳性对照组（CEE3）:尼尔雌醇片以蒸馏水溶解后,灌胃给药1mg/kg。除阳性对照组每周灌胃一次,其余各组均每天灌胃一次（1ml/100g）。灌胃3个月后测定股骨骨密度（BMD）、血液生化指标、尿生化指标、降钙素（CT）、骨钙素（BGP）及雌二醇（E₂）含量,并进行大鼠股骨干骺端松质骨扫描电镜观察。结果:模型组股骨骨密度显著低于空白对照组（P＜0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组骨密度值与模型组相比较有所提高,其中益骨颗粒中、高剂量组具有显著差异（P＜0.05,0.01）。模型组血钙、血磷含量显著低于空白对照组（P＜0.05）,碱性磷酸酶、羟脯氨酸含量显著高于空白对照组（P＜0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组血钙含量与模型组相比增加,碱性磷酸酶含量与模型组比较有所降低,其中中、高剂量组具有显著差异（P＜0.05,0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组血磷含量与模型组相比增加,羟脯氨酸含量与模型组相比降低,其中高剂量组具有显著差异（P＜0.05）。模型组尿钙、尿磷含量显著高于空白对照组（P＜0.05）。益骨颗粒低、中、高剂量组尿钙、尿磷含量与模型组相比有所降低,其中高剂量组具有显著差异（P＜0.05,0.01）。模型组降钙素（CT）及雌二醇（E₂）含量显著低于空白对照组（P＜0.01）。益骨颗粒低、中、高剂量组含量与模型组相比增加,其中降钙素（CT）含量中、高剂量组与模型组具有显著差异（P＜0.05,0.01）,雌二醇（E₂）含量低、中、高剂量组与模型组具有显著差异（P＜0.01）。模型组骨钙素（BGP）含量与空白对照组比较无差异。益骨颗粒低、中、高剂量组骨钙素（BGP）含量与模型组相比也无显著差异。模型组骨小梁排列稀疏,直径变细,骨髓腔较空旷。而益骨颗粒中、高剂量组对此有所改善。结论:益骨颗粒能够增加去卵巢大鼠的骨密度,改善松骨质微结构。益骨颗粒低、中、高剂量组碱性磷酸酶和骨钙素的含量低于模型组,能降低摘除卵巢后雌激素急剧下降所致的高骨转换率,有效延缓骨质疏松的发生。第四章益骨颗粒对成骨细胞的影响目的:运用中药血清药理学方法,观察益骨颗粒含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞（OB）体外增殖的影响及对成骨细胞分泌IL-6和TNF-α的影响。方法:雌性12月龄SD大鼠80只,随机分为生理盐水组、益骨颗粒低剂量（8g生药/kg）、中剂量（16g生药/kg）、高剂量（64g生药/kg）组,每日灌胃一次,连续12天,分别在灌胃后的1h、1.5h、2h采血,分离血清,用含不同浓度益骨颗粒的血清培养SD新生大鼠颅骨OB,MTT法检测细胞增殖情况。将SD大鼠30只,随机分为3组（空白组、益骨颗粒组和尼尔雌醇组）,每组10只,益骨颗粒（BBG）组按64g生药/kg灌胃给药,尼尔雌醇（CEE3）组按1mg/kg（尼尔雌醇片以蒸馏水溶解）灌胃给药,空白组给予同等体积的生理盐水。每日灌胃1次,连续12天,末次给药前禁食12 h,自由饮水,在末次给药后1.5 h乙醚麻醉,眼眶取血,3000r/min离心10 min,取上清。体外分离、培养成骨细胞,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞IL-6和TNF-α的水平。结果:末次灌胃后1.5 h采血组的吸收度（A）值明显高于各组其它时间（P＜0.05）,不同剂量各浓度的益骨颗粒含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用,其中以高剂量组的稀释比为20%的血清浓度最佳。结论:益骨颗粒含药血清对OB增殖具有明显的促进作用;益骨颗粒用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量8倍连续12天灌胃、末次灌胃后1.5 h采血,血清添加浓度以20%为宜。益骨颗粒组和尼尔雌醇组IL-6和TNF-α低于空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。

全文目录

前言  6-12
中文摘要  12-16
英文摘要  16-19
第一章益骨颗粒的镇痛、抗炎作用  19-30
  一、镇痛作用  19-23
  二、抗炎作用  23-30
第二章益骨颗粒对小鼠肠系膜微循环的影响  30-36
  1.实验材料  30
  2.实验条件  30
  3.实验方法  30-31
  4.实验结果  31-35
  5.讨论  35-36
第三章益骨颗粒对实验性骨质疏松大鼠模型的影响  36-53
  1 实验材料  36
  2 实验方法  36-38
  3 实验结果  38-50
  4 讨论  50-53
第四章益骨颗粒对成骨细胞的影晌  53-61
  一、益骨颗粒对成骨细胞增殖的影响  53-56
  二、益骨颗粒对成骨细胞分泌IL-6和TNF-α的影响  56-61
全文总结  61-63
  一、实验性骨质疏松模型  61-62
  二、实验总结  62-63
参考文献  63-66
英文缩略词表  66-67
综述  67-76
攻读硕士学位期间取得的学术成果  76-77
致谢  77

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