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VEGF诱导人上皮性卵巢癌细胞系HO-8910的功能蛋白质组研究

作　者: 张帆
导　师: 吴晓英
学　校: 中南大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 血管内皮生长因子(VEGF) 卵巢癌蛋白质组差异蛋白质侵袭性
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景与目的:妇科生殖道肿瘤中,卵巢癌的发生率低于宫颈癌和宫体癌,位居第三位,但死亡率却是最高的。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作为肿瘤新生血管形成中最重要的血管生成因子,对多种肿瘤侵袭性生长、转移起关键作用。研究结果已证实VEGF与卵巢癌的增殖、浸润和转移密切相关,且VEGF能够通过自分泌或旁分泌的方式作用于肿瘤细胞自身,从而增强肿瘤细胞的侵袭力,但其作用机制尚不清楚。为探讨VEGF及其相关蛋白与卵巢癌侵袭力的关系,本研究分析VEGF体外对卵巢癌细胞系HO-8910蛋白质表达谱的影响,为寻找VEGF促进卵巢癌早期侵袭、转移相关蛋白提供新的方法和线索。方法:(1)以卵巢癌HO-8910细胞系为研究对象,常规方法培养至70%-80%融合,3%低血清培基饥饿24小时,用VEGF诱导HO-8910细胞24小时,同时设无VEGF诱导的HO-8910细胞为空白对照。(2)提取两组细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离蛋白质,PD Quest图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laster desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白。(3)Real timePCR检测部分差异蛋白质:磷酸丙糖异构酶(Tim)、亲环素A(PPIaseA)、核纤层蛋白(Lamin-A/C)及埃兹蛋白(Ezrin)的mRNA在两组细胞中表达差异。(4)Western Blot及免疫细胞化学技术检测差异蛋白质Ezrin在两组细胞中的表达水平及差异。(5)透射电子显微镜观察VEGF诱导前后HO-8910细胞超微结构改变。结果:(1)建立了VEGF诱导前后人上皮性卵巢癌细胞系HO-8910的2-DE图谱,图像分析识别了30个差异表达蛋白质,质谱鉴定了17个非冗余蛋白质。(2)Real time PCR显示了4个差异蛋白质(Tim、PPIase A、Lamin-A/C、Ezrin)的mRNA在两组细胞中的表达差异:VEGF诱导后,Tim在HO-8910细胞中表达上调,PPIase A、Lamin-A/C及Ezrin则表达下调,与蛋白质组学分析结果一致。(3)Western Blot及细胞免疫化学结果也表明了VEGF诱导后Ezrin蛋白在HO-8910细胞中表达下调。(4)透射电子显微镜观察表明VEGF诱导后HO-8910细胞异型性增加。结论:(1)首次建立了VEGF诱导前后HO-8910细胞系的双向凝胶电泳图谱,图像分析识别了30个差异表达的蛋白质点,质谱鉴定了其中17个非冗余蛋白质,这些差异蛋白主要涉及肿瘤细胞的侵袭、转移和增殖。(3)Real time PCR、Western Blot及免疫细胞化学进一步证实了VEGF诱导后HO-8910细胞中Ezrin、PPIase A及Lamin-A/C蛋白表达下调:Tim蛋白则表达上调,这些蛋白主要与癌细胞的侵袭力相关。(3)VEGF诱导后,HO-8910细胞的异型性进一步增加。(4)VEGF有可能通过调控Ezrin、PPIase A、Lamin-A/C、Tim等相关蛋白的表达来影响卵巢癌细胞的侵袭、转移和增殖,这具有重要的理论意义和临床应用价值。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
缩略词表及注释  10-12
前言  12-14
第一章材料与方法  14-23
  1.1 材料  14-15
  1.2 方法  15-23
第二章结果  23-30
  2.1 双向凝胶电泳图谱的建立  23
  2.2 差异反应蛋白质点的质谱鉴定  23-27
  2.3 Real time PCR验证差异蛋白Tim、Lamin-A/C、PPlase A及Ezrin 在mRNA水平的表达差异  27-28
  2.4 Western blot验证VEGF诱导前后HO-8910中Ezrin蛋白的表达变化  28
  2.5 免疫细胞化学验证VEGF诱导前后HO-8910中Ezrin蛋白的表达变化  28-29
  2.6 透射电子显微镜对细胞超微结构的观察  29-30
第三章讨论  30-34
第四章结论  34-35
参考文献  35-40
综述  40-48
  参考文献  46-48
致谢  48-49
攻读学位期间的主要成果  49

VEGF诱导人上皮性卵巢癌细胞系HO-8910的功能蛋白质组研究

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