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雌激素和HSP27与冠心病的关系及其对内皮细胞功能的影响

作　者: 周琴
导　师: 易光辉
学　校: 南华大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 冠心病人脐静脉内皮细胞雌激素热休克蛋白27 血脂一氧化氮内皮素-1 细胞间黏附分子-1
分类号: R541.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究背景:近年来,冠心病（coronary heart disease,CHD）发病率逐年升高,已成为影响人类健康的主要疾病之一。研究其病理生理机制并控制相应的危险因素是当今医学研究的重要课题。目前认为,冠心病的发病是在多种危险因素作用下,是冠状动脉发生严重粥样硬化性狭窄和阻塞,或在此基础上合并痉挛以及血栓形成,血管阻塞,引起冠状动脉供血不足,心肌缺血或梗塞的一种心脏病。内皮功能损伤、平滑肌细胞增殖、血小板激活聚集以及血栓形成是其主要机制,其中炎性反应贯穿整个过程。冠心病男女患病率差异极大,绝经期前女性发病率与男性相比为1:3～1:10,绝经后女性与男性趋于一致。这种差异不能完全由常见的冠心病危险因素来解释,提示与雌激素的水平有关。雌激素在心血管疾病的发生发展中发挥重要的作用。雌激素能影响血脂代谢,可降低血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平,并升高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）;雌激素具有抗氧化作用,本身可以清除自由基,并可抗脂质过氧化反应;雌激素可以改善内皮功能,减少缩血管物质的释放,使血管扩张从而增加血流量,还能刺激成熟内皮细胞释放一氧化氮并产生抗内皮细胞凋亡和促增殖作用,同时它还可以加速血管损伤后的管壁的再内皮化过程,这些方面都可以起抗动脉粥样硬化的作用。但雌激素的具体作用机制尚有待进一步深入研究。血管内皮是介于循环血液与血管平滑肌之间的生理屏障。内皮功能障碍（Endothelial dysfunction,ED）是动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）之源,存在于AS发生、发展的各个阶段,预防及控制内皮功能障碍已成为防治冠心病的新趋势。热休克蛋白27（Heat shock protein 27, HSP27）是小分子量热休克蛋白家族（Small Heat shock protein, sHSP）中的重要一员,在机体应激状态下表达增加,通过分子伴侣作用、调节细胞运动、抗细胞凋亡、抗氧化应激和抗炎等作用保护细胞功能。最近有报导指出HSP27是一种动脉粥样硬化的生物学标志,血清HSP27水平与动脉粥样硬化程度呈负相关。HSP27可能成为心血管疾病治疗的新靶点。第一部分冠心病患者血清雌激素水平与HSP27和血脂水平的关系目的:研究表明雌激素可通过调节脂代谢在心血管疾病中起保护作用。HSP27是一种动脉粥样硬化的生物学标志物,血清HSP27水平与动脉粥样硬化程度呈负相关。HSP27可由雌激素诱导产生,是一种ERβ相关蛋白,并可与ERβ共同抑制雌激素信号。那么冠心病患者血清HSP27水平与雌激素水平的相关性如何?血清HSP27水平是否与雌激素调节的血脂水平相关?HSP27是否参与雌激素对脂质的调节?本实验拟通过收集冠心病患者和健康人血清,检测血清HSP27、雌激素和血脂含量,来观察雌激素与HSP27和血脂的相关性。方法:按照研究入选标准,调查2009年2月至2009年9月期间湖南省郴州市第一人民医院心脏内科住院的冠心病患者和健康体检者。1.记录研究对象的临床资料:年龄、性别、身高、体重、心率、生活习惯、糖尿病史、高血压病史。2.使用Bayer ADVIA 2400型全自动生化分析仪,采用酶法检测患者血脂水平。3.使用Bayer ADVIA Centaur型全自动化学发光免疫分析仪,采用化学发光法测定血清雌二醇（E₂）水平。4.ELISA法检测血清HSP27水平。结果:CHD组年龄、BMI、高盐饮食、吸烟、饮酒、糖尿病发病率、高血压病发病率,均明显高于健康对照组。血清E2、HSP27和血脂水平在CHD组与健康对照组之间、女性CHD组与男性CHD组之间,以及女性CHD患者≤55岁组和>55岁组之间有显著性差异。冠心病患者血清E₂水平与HSP27及血脂水平之间的线性相关分析显示:血清E₂水平与TC、LDL-C之间呈显著负相关,相关系数r分别为-0.6669（P<0.05）、-0.5739（P<0.05）;E₂与HDL-C、HSP27水平呈显著正相关,相关系数r分别为0.7019 （P<0.01）、0.7946 （P<0.01）;HSP27水平与血脂之间没有明显相关性。第二部分HSP27对雌激素诱导的内皮保护作用的影响目的:第一部分实验结果显示冠心病患者血清HSP27水平与雌激素水平相关,HSP27不参与雌激素调节脂质代谢。那么HSP27是否参与雌激素的内皮保护作用?外源性雌激素是否也能诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC） HSP27表达增加,是否具有剂量依赖性?本实验拟通过不同浓度雌二醇（E₂）及雌激素受体拮抗剂他莫昔芬（tamoxifen）处理HUVEC来观察HSP27表达的改变,以及通过HUVEC转染HSP27 siRNA来观察HSP27对雌激素内皮保护作用影响。方法:1.分别用不同浓度(10^-9、10^-8、10^-7mol/L) E₂处理HUVEC 24小时;10^-7mol/L雌二醇及10^-6mol/L他莫昔芬处理HUVEC 24小时。以空白组为阴性对照,RT-PCR和Western blot检测HSP27的表达。2.分别转染HSP27 siRNA和mock RNA 48小时后,再与10^-7mol/L E₂孵育24小时。空白组做为阴性对照, RT-PCR和Western blot检测HSP27的表达;分别用硝酸还原酶法和ELISA法检测培养基中NO和ET-1的含量;ELISA法检测细胞表面ICAM-1的含量。结果:不管是mRNA水平还是蛋白水平,E₂处理HUVEC可上调HSP27的表达,并且具有剂量依赖性,表达的峰值在10^-7mol/L。10^-6mol/L他莫昔芬可阻断10^-7mol/L E₂的作用。RT-PCR、Western blot检测HSP27 siRNA序列能明显下调HSP27mRNA及蛋白的表达。HUVEC转染HSP27 siRNA 48小时后再与10^-7mol/L E₂孵育24小时,能显著减弱E₂对内皮细胞分泌NO和ICAM-1的影响,而对ET-1没有明显影响。结论:1.冠心病患者血清E₂水平与HSP27正相关,雌激素的抗心血管病作用可能与HSP27有关。2. E₂可诱导HUVEC产生HSP27增加,具有剂量依赖性,与雌激素受体有关。3. HSP27在E₂诱导的内皮细胞ICAM-1和NO的产生中有潜在作用。

全文目录

英文缩略语索引  4-6
中文摘要  6-10
英文摘要  10-15
前言  15-19
第一部分冠心病患者血清雌激素水平与HSP27 和血脂水平的关系  19-28
  1. 资料与方法  19-22
  2. 实验结果  22-27
  3. 实验小结  27-28
第二部分 HSP27 对雌激素诱导的内皮保护作用的影响  28-43
  1. 材料与方法  28-35
  2. 实验结果  35-42
  3. 实验小结  42-43
讨论  43-48
结论  48-49
参考文献  49-54
综述  54-63
  参考文献  59-63
硕士期间发表的论文  63-64
致谢  64-65

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