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抑制胰岛移植物TF的表达对体内IBMIR动物模型影响的急性研究

作　者: 梁琪
导　师: 王维
学　校: 中南大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: 胰岛细胞移植 IBMIR 反义RNA TF SCID鼠
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：在临床胰岛移植中,注入门静脉的胰岛与血液接触,立即发生一种凝血/炎症反应过程,我们称之为立即经血液介导的炎症反应(IBMIR),IBMIR是胰岛植入后的最早损伤,将导致绝大多数移植物的丢失和功能损伤,是造成胰岛移植早期细胞损伤最重要的原因,而胰岛细胞表面的组织因子(tissue factor,TF)是激发IBMIR凝血反应的始动因子。本实验通过反义RNA技术,干扰组织因子(TF)在猪胰岛细胞的表达,对胰岛进行预处理,并建立体内IBMIR模型,观察抑制TF表达后的胰岛细胞对移植后IBMIR发生程度的影响。方法：采用反义RNA技术,运用实时定量RT-PCR方法筛选出对TF沉默效果最佳反义RNA,转染新生猪胰岛细胞。建立猪胰岛细胞经门静脉移植于SCID小鼠的异种IBMIR体内模型,将沉默TF表达后的新生猪胰岛细胞在IBMIR体内模型中各项指标(血糖、C肽、TAT)进行检测,并取肝脏组织作病理学检测,从而观察IBMIR发生程度。结果：经RT-PCR方法检测oligoTF-1006对胰岛细胞TF沉默效果最佳,其抑制效果在转染后第四天最好。将沉默TF表达后的猪胰岛细胞经门静脉移植于SCID小鼠后,其1小时内血糖降低程度、C肽值变化、血清TAT值及胰岛细胞周围血栓形成均显示其IBMIR的发生程度较对照组、空白转染组明显减轻。结论：TF作为IBMIR的启动因子,反义RNA能显著抑制胰岛细胞中TF的表达,将沉默TF表达的猪胰岛细胞经门静脉移植于SCID鼠,能够减少胰岛移植初期的凝血激活及血小板活化,减轻胰岛细胞移植后IBMIR的发生程度,有望在将来应用在临床上减少移植物的丢失,提高移植后胰岛存活率。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
英文缩略词表  7-9
前言  9-12
第一章材料与方法  12-17
  1.1 反义RNA沉默猪胰岛细胞TF表达  12-13
    1.1.1 仪器材料  12-13
    1.1.2 猪胰岛细胞的分离纯化与活性检测  13
    1.1.3 对猪胰岛细胞进行转染  13
  1.2 体内IBMIR实验  13-17
    1.2.1 实验材料及设备  13-14
    1.2.2 动物准备  14-15
    1.2.3 实验动物分组  15
    1.2.4 检测指标  15-16
    1.2.5 统计学分析  16-17
第二章结果  17-25
  2.1 反义RNA沉默胰岛细胞TF的表达  17-19
    2.1.1 反义RNA转染猪胰岛细胞转染率检测  17
    2.1.2 Real-time PCR  17-19
    2.1.3 免疫印记Western Blotting  19
  2.2 体内IBMIR实验  19-25
    2.2.1 各组动物移植后血糖水平变化  19-20
    2.2.2 C肽检测  20
    2.2.3 血清TAT检测结果  20-22
    2.2.4 移植物组织学观察  22-25
第三章讨论  25-29
第四章结论  29-30
参考文献  30-33
综述  33-41
  参考文献  38-41
致谢  41-42
攻读学位期间主要的研究成果  42

抑制胰岛移植物TF的表达对体内IBMIR动物模型影响的急性研究

内容摘要

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