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马流感H3N8亚型血清学诊断方法的建立及灭活疫苗的初步研制

作　者: 王英原
导　师: 王立群
学　校: 东北农业大学
专　业: 应用微生物学
关键词: 马流感 血清学 诊断方法 灭活疫苗
分类号: S854.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 59次
引　用: 1次
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内容摘要


马流行性感冒(Equine influenza)简称马流感,是由正粘病毒科(Orthomyxoviridae)流感病毒属(Influenzavirus)马A型流感病毒(EIV)引起马属动物的一种急性暴发式流行的传染病。是对养马业及赛马业影响最为严重的传染病之一,世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病。2007年10月,位于我国新疆自治区北部的富蕴县发现马流感疑似病例,并自西向东迅速蔓延。本实验室研究人员通过现地病料采集,成功分离得到马流感病毒,经过鉴定,确定为马流感H3N8亚型;2008年期间,又在辽宁、内蒙、武汉等地采集的鼻拭子中分离得到多株病毒。本研究通过经典的血凝-血凝抑制实验(HA-HI)及间接ELISA方法,成功建立起针对本次国内马流感暴发病原的抗体血清学检测方法,并成功应用于实践。建立的血清学诊断方法特异性、敏感性、重复性良好,为马流感诊断试剂的研制奠定了基础。目前我国研制的马流感灭活疫苗有马甲1型(H7N7)疫苗、马甲2型(H3N8)疫苗、马流感双价疫苗3种,但没有大面积应用,一旦马流感发生后,主要采取一些对症治疗措施。马流感病毒与其它流感病毒一样,容易变异,随着我国养马业和赛马业的发展,国际间马匹流动数量的增加,新型疫苗的研制势在必行。本研究采用本次国内马流感流行毒株做为种毒,用两种佐剂(白油和氢氧化铝)研制了马流感H3N8亚型灭活马流感疫苗,通过试验得到马流感流行毒株疫苗诱导产生高水平抗体的最佳条件,为马甲2型灭活疫苗的研制提供了参考。

全文目录


摘要  10-11
ABSTRACT  11-12
1 引言  12-25
  1.1 马流感的概念  12
  1.2 马流感病毒  12-17
    1.2.1 马流感病毒概况和命名  12-13
    1.2.2 病毒的分子结构和功能  13-16
    1.2.3 马流感病毒的复制  16
    1.2.4 马流感病毒的变异  16-17
  1.3 流行病学  17-18
    1.3.1 我国马流感的流行情况  17-18
    1.3.2 国外马流感的流行  18
  1.4 临床病状与病理变化  18-19
  1.5 马流感的诊断  19-23
    1.5.1 病原学诊断技术  19-21
    1.5.2 血清学诊断  21-23
  1.6 马流感的防治  23-24
  1.7 本研究的目的及意义  24-25
2 材料及方法  25-31
  2.1 试验材料  25-26
    2.1.1 主要试剂  25
    2.1.2 主要仪器  25-26
    2.1.3 其他材料  26
  2.2 实验方法  26-31
    2.2.1 抗原制备及马血样处理  26-28
    2.2.3 血凝抑制（HI）方法的建立  28-29
    2.2.4 灭活疫苗的初步研制  29-31
3 结果与分析  31-41
  3.1 抗原效价  31
  3.2 间接ELISA 方法  31-34
    3.2.1 反应参数确定  31-32
    3.2.2 判定标准  32
    3.2.3 敏感性试验及阻断试验  32-33
    3.2.4 交叉试验  33
    3.2.5 重复性实验  33
    3.2.6 抗原保存期试验  33-34
  3.3 血凝抑制试验结果  34-36
    3.3.1 抗原的处理结果  34
    3.3.2 血清的处理结果  34
    3.3.3 特异性实验结果  34-35
    3.3.4 重复性实验结果  35-36
  3.4 血凝抑制试验与间接ELISA 的比较  36-37
  3.5 灭活疫苗试验  37-41
    3.5.1 安全检验  37
    3.5.2 马流感疫苗的效力试验  37-39
    3.5.3 疫苗保存期试验  39
    3.5.4 抗体效价跟踪结果  39-41
4 讨论  41-44
  4.1 马流感病毒的增殖条件  41
  4.2 间接ELISA 试验条件的确定  41
  4.3 影响HI 试验的因素  41-42
  4.4 马流感灭活疫苗的优势及需要解决的问题  42-44
5 结论  44-45
致谢  45-46
参考文献  46-50
攻读学位期间发表的学术论文  50

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医临床医学 > 兽医诊断学 > 实验室诊断法
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