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重组人血管内皮抑制素联合5-氟脲嘧啶对绒癌JEG-3细胞株增殖和凋亡的影响

作　者: 陈武娟
导　师: 刘惠宁
学　校: 中南大学
专　业: 妇产科学
关键词: JEG-3细胞 YH-16 增殖和凋亡 VEGF-B
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：观察重组人血管内皮抑素(Endostar,YH-16,恩度)、5-氟脲嘧啶(5-fluorouraeil,5-FU)以及两者联合使用对抑制绒癌JEG-3细胞生长和诱导其凋亡的影响,探讨两者联合用药方式产生协同作用的分子机制。方法：(1)采用MTT法观察不同浓度的YH-16和5-Fu,以及两者联合用药对高侵袭性人绒毛膜癌细胞JEG-3细胞作用不同时间的生长抑制率；(2)流式细胞检测法比较YH-16、5-Fu单药及联合用药对JEG-3细胞凋亡和细胞周期的影响；(3)RT-PCR法检测YH-16、5-Fu单药及联合用药对JEG-3细胞中血管内皮生长因子VEGF-B表达的影响。结果：(1)MTT法观察不同药物组对JEG-3细胞作用不同时间的生长抑制率。在同一药物浓度下,不同药物组细胞生长抑制率均随作用时间(24、48、72小时)的延长而增大,组间差异均具有统计学意义,P<0.05。在同一作用时间下,在YH-16不同浓度组中显示：200ug/m1组的细胞生长抑制率高于50ug/ml、100ug/ml组,有统计学意义,P<0.05；200ug/ml组与400ug/ml组比较,无统计学意义,P>0.05；不同浓度5-FU(0.1mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml)组的细胞生长抑制率与药物浓度具有直线相关性,相关系数r均>0.9,P<0.05。5-FU作用24、48、72小时的IC 50分别为1.56 mg/ml、0.52mg /ml和0.31 mg/ml.200ug/ml YH-16联合不同浓度5-FU(0.1mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、lmg/ml)组作用不同时间后的细胞生长抑制率远远高于单用对应浓度的YH-16及5-FU组,P<0.05,有统计学意义。随着5-FU浓度的增大,生长抑制率增大。5-FU在24小时、48小时和72小时的IC50分别为：0.94mg/ml、0.31mg/ml和0.10mg/ml。计算24小时、48小时和72小时的联合指数CI值分别为0.57、0.49和0.50,认为联合用药具有协同作用。(2)流式细胞仪检测法比较YH-16、5-FU及两者联用对JEG-3细胞凋亡率和细胞周期的影响。各药物作用48小时后,200ug/ml YH-16组、0.5mg/ml 5-FU组以及两者联合组的细胞凋亡率均明显大于对照组,P<0.05。联合用药组细胞凋亡率明显高于单独使用5-FU及YH-16组,P<0.05。不同药物组Go/G1期细胞百分比较对照组高,G2/M期细胞百分比较对照组减少,P<0.05。联合用药组G0/G1期细胞百分比大于YH-16、5-FU单独用药组,P<0.05。(3)RT-PCR法检测YH.16、5-FU及两者联用对JEG-3细胞内VEGF-B表达的影响。各药物干预48小时后,200ug/ml YH-16组、0.5mg/ml 5-FU组以及两者联合组细胞内VEGF-B表达量较对照组均降低,P<0.05。联合用药组细胞的VEGF-B表达量明显低于各单独用药组,P<0.05。结论：1.YH-16可直接抑制JEG-3细胞的生长,可使JEG-3细胞阻滞于G0/G1期,抑制JEG-3细胞的增殖,诱导其凋亡,作用机制可能与下调JEG-3细胞VEGF-B mRNA的表达有关。2.YH-16联合5-Fu治疗对抑制JEG-3细胞生长、诱导其凋亡均具有协同作用,可提高5-Fu化疗的疗效。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
缩略语表  11-12
第一章 前言  12-15
第二章 材料与方法  15-25
  2.1 材料与仪器  15-16
  2.2 实验试剂的配制  16-17
  2.3 实验方法  17-24
  2.4 统计学方法  24-25
第三章 结果  25-32
  3.1 MTT法测定JEG-3细胞生长抑制率  25-28
  3.2 流式细胞仪检测绒癌JEG-3细胞凋亡率和细胞周期  28-31
  3.3 RT-PCR检测JEG-3细胞VEGF-B mRNA表达的差异  31-32
第四章 讨论  32-37
  4.1 YH-16对肿瘤细胞生长增殖的抑制作用  32-33
  4.2 YH-16联合化疗抗肿瘤治疗的协同作用  33-34
  4.3 YH-16临床应用的前景  34-37
第五章 结论  37-38
参考文献  38-41
综述  41-55
  参考文献  49-55
致谢  55

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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