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目的:通过观察便秘型肠易激综合征模型大鼠经加味二至煎煎剂治疗后粪便粒数、粪便含水量、肠道敏感性及肠道传输功能的变化,并运用免疫组化及放射免疫方法观测肠组织中MC、5-HT、ICC及外周血中雌二醇、睾酮的变化,揭示其相关的作用机制,为临床研究提供理论依据。方法:造模期:适应性饲养5天,示一切正常后,将72只Wistar大鼠(雌雄各半,体重120-210g)随机分为正常组和模型组。正常组24只,雌雄各半;模型组48只,雌雄各半。正常组大鼠正常饲食,饮水,不灌胃;模型组大鼠给予冰水(0-4℃过滤除菌后的自来水)2ml/只,每日1次灌胃,共28天。观察大鼠灌胃后24h的粪便粒数和含水量。每隔4天测一次大鼠体重。在冰水灌胃的第28天,取两组各16只大鼠(雌雄各半)进行CRD刺激,将腹部撤离反射(Abdominal Withdrawal Reflex,AWR)量化,进行评分,观测两组大鼠之间及每组大鼠内部雌雄大鼠之间肠道敏感性的变化。评分完毕后,取两组各8只大鼠(雌雄各半)禁食不禁水24小时后,用阿拉伯明胶与墨汁的混悬液灌胃(1ml/只),20min后断头处死取血,每只取血4ml,测血清雌激素、血清睾酮;剖腹,取全胃肠,测碳末推进比,测完后即刻取大鼠的小肠(距回盲部5cm)、回盲部、结肠(距肛门5cm)各0.5cm,立即用生理盐水冲洗,10%的中型缓冲福尔马林液固定后,常规石蜡包埋切片,HE染色,光学显微镜下观察组织的形态及结构的变化。治疗期:造模成功后第二天,即实验的第29天将模型组大鼠随机分为空白对照组、加味二至煎组、西沙必利组。空白对照组和加味二至煎组各16只,西沙必利组8只,每组均雌雄各半,开始治疗。按100g体重大鼠1ml分别给予加味二至煎煎剂、西沙必利混悬液和生理盐水灌胃,每天一次,每组均连续灌胃14天。正常组正常饲食,饮水,不灌胃。观察灌胃后24h各组大鼠粪便粒数和含水量的变化,每隔4天测一次大鼠体重,观察各组大鼠体重的变化。治疗第14天,末次给药后取正常组,空白对照组,加味二至煎组各16只大鼠,进行AWR评分,观测各组大鼠之间及每组大鼠内部雌雄大鼠之间肠道敏感性的变化。评分完毕后,取三组各8只大鼠(雌雄各半)断头取血,每只4ml,测血清雌激素、血清睾酮,并留取肠标本做以下指标测定:肥大细胞(MC)、5-羟色氨(5-HT)、局部肠组织病理观察。同时取正常组、空白对照组、加味二至煎组剩余的各8只大鼠和西沙必利组的8只大鼠(雌雄各半),禁食不禁水24小时后,用阿拉伯明胶与墨汁的混悬液灌胃(1ml/只),20min后断头处死,剖腹,取全胃肠,测碳末推进比,测完后即刻取大鼠的小肠(距回盲部5cm)、回盲部各0.5cm,免疫组化法测c-kit的光密度、积分光密度及阳性面积。结果:(1)冰水灌胃28天后,模型组大鼠粪质干结,粪便粒数减少,肠道传导功能下降,肠道敏感性降低,与正常组对比均有显著差异(P<0.05)。雌性大鼠肠道容量阈值比雄性大鼠低,两者相比有显著差异(P<0.05),即雌性大鼠肠道更易致敏。(2)经加味二至煎治疗后,加味二至煎组大鼠粪便粒数增加,粪便含水量上升,肠道传导功能及敏感性逐渐恢复,回盲部及结肠组织中MC数量及5-HT含量下降,小肠及结肠组织中ICC数量上升,到第2周末与正常组大鼠相比均无显著差异(P>0.05)。(3)经西沙必利治疗2周后,西沙必利组大鼠粪便粒数增加,肠道传导功能逐渐恢复,小肠及结肠组织中ICC的数量增多,与正常组相比无显著差异(P>0.05),其粪便含水量虽有所上升,但与正常组相比仍存在显著差异(P<0.05)。(4)模型组雌性大鼠外周血中雌二醇含量增高,与同组雄性大鼠相比肠道敏感性增强(P<0.05),加味二至煎治疗后,雌二醇含量降低,肠道敏感性恢复正常。(5)光镜下观察各组大鼠各段肠组织:结构完整,细胞排列整齐,未见急慢性炎症、糜烂及溃疡等器质性改变。结论:加味二至煎煎剂可能通过改变肠组织中MC、5-HT、ICC及外周血中E2的含量来改善C-IBS模型大鼠肠道动力及敏感性的异常变化。
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