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磷酸肌酸钠对小鼠移植性S_（180）肉瘤血管生成的作用及其机制研究

作　者: 韩文峰
导　师: 魏素菊
学　校: 河北医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 磷酸肌酸钠 S180肉瘤 血管生成 金属蛋白酶组织抑制因子-2 基质金属蛋白酶-2 血管内皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 微血管密度
分类号: R73-36
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:探讨磷酸肌酸钠(Creatine Phosphate Sodium, CP)对小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及其可能的机制。方法:选取60只健康雄性昆明小鼠,无菌条件下将S180肉瘤腹水瘤细胞接种到其右腋皮下,构建S180肉瘤小鼠模型。接种次日,将小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、CP低、中、高剂量组,每组15只,开始腹腔注射给药,低、中、高剂量CP组分别予以磷酸肌酸钠200mg/kg/d、400mg/kg/d、800mg/kg/d,对照组予以生理盐水,腹腔注射,每只0.2ml,连续给药7天,第10天脱颈椎法处死小鼠,剥取瘤体称重,计算抑瘤率。流式细胞术测定肿瘤组织金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMP-2)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)蛋白的表达;免疫组化检测肿瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)蛋白的表达及微血管密度(microvasvular density, MVD);采用半定量RT-PCR方法检测移植瘤组织中VEGFmRNA、bFGF mRNA的表达水平。结果:1瘤重及抑瘤率:对照组瘤重为(3.65±0.22)g;CP低剂量组瘤重为(3.48±0.20)g,抑瘤率为4.66%;CP中剂量组瘤重为(3.43±0.23)g,抑瘤率为6.03%;CP高剂量组瘤重为(2.97±0.10)g,抑瘤率为18.63%;对照组、CP低、中剂量组三组之间瘤重比较差异无统计学意义(P>0.05);CP高剂量组分别与对照组、CP低、中剂量组瘤重比较,小鼠移植性肉瘤重量减小,差异有统计学意义(P<0.01)。2流式细胞术检测CP对移植瘤组织中TIMP-2、MMP-2蛋白表达的影响:对照组、CP低剂量组、CP中剂量组、CP高剂量组TIMP-2蛋白表达均道值分别为276.59±7.96、284.45±3.76、286.32±10.41、308.90±14.50。对照组、CP低剂量组、CP中剂量组、CP高剂量组MMP-2蛋白表达均道值分别为386.47±2.25、382.41±5.08、378.52±8.89、323.10±9.27;CP低、中剂量组和对照组三组之间比较,TIMP-2蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05), MMP-2蛋白表达差异亦无统计学意义(P>0.05)。CP高剂量组分别与对照组、CP低、中剂量组相比,TIMP-2蛋白的表达量升高,MMP-2蛋白的表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。3应用免疫组化法检测各组肿瘤组织内VEGF、bFGF及MVD的表达水平:对照组、CP低剂量组、CP中剂量组、CP高剂量组VEGF蛋白表达值分别为4.67±0.48、4.47±0.64、4.33±0.72、3.07±0.59;对照组、CP低剂量组、CP中剂量组、CP高剂量组bFGF蛋白表达值分别为4.00±0.76、3.80±0.77、3.60±0.74、3.00±0.53;对照组、CP低剂量组、CP中剂量组、CP高剂量组MVD值分别为15.20±1.08、14.80±0.94、14.53±0.92、11.73±1.38;CP低、中剂量组和对照组三组之间比较,VEGF和bFGF的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);CP高剂量组分别与对照组、CP低、中剂量组相比,VEGF蛋白表达量下降(P<0.01)、bFGF的蛋白表达量亦下降(P<0.05),差异有统计学意义。CP低、中剂量组和对照组三组之间比较,MVD值差异无统计学意义(P>0.05);CP高剂量组分别与对照组、CP低、中剂量组相比,MVD值降低,差异有统计学意义(P<0.01)。4采用半定量RT-PCR检测各组肿瘤组织内VEGFmRNA、bFGF mRNA的表达水平:对照组、CP低剂量组、CP中剂量组、CP高剂量组VEGFmRNA表达相对值分别为0.3898±0.0025、0.3813±0.0114、0.3783±0.0089、0.3238±0.0115;对照组、CP低剂量组、CP中剂量组、CP高剂量组bFGFmRNA表达相对值分别为0.1602±0.0059、0.1556±0.0038、0.1548±0.0041、0.1393±0.0029。CP低、中剂量组和对照组三组之间比较,VEGFmRNA和bFGFmRNA的表达量均无统计学差异(P>0.05);CP高剂量组分别与对照组、CP低、中剂量组相比, VEGFmRNA、bFGFmRNA表达量均减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:1高剂量CP对小鼠移植性S180肉瘤的增殖具有抑制作用,低、中剂量的CP对小鼠移植性S180肉瘤的增殖无明显影响。2高剂量CP可下调小鼠移植瘤中MMP-2蛋白的表达、上调TIMP-2蛋白表达,低、中剂量的CP对MMP-2、TIMP-2蛋白的表达无明显影响。3高剂量CP可下调小鼠移植瘤中VEGFmRNA、bFGF mRNA及蛋白的表达,低、中剂量的CP对移植瘤中VEGFmRNA、bFGF mRNA及蛋白的表达无明显影响。4高剂量的CP对小鼠移植瘤血管生成具有抑制作用,低、中剂量的CP对小鼠移植瘤血管生成无明显影响。5本实验证实CP无促进小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用,从而为肿瘤患者化疗应用CP保护心脏提供了参考依据。

全文目录


中文摘要  4-8
英文摘要  8-12
研究论文 磷酸肌酸钠对小鼠移植性5180肉瘤血管生成的作用及其机制研究  12-50
  前言  12-13
  材料与方法  13-20
  结果  20-24
  附图  24-35
  附表  35-37
  讨论  37-44
  结论  44-45
  参考文献  45-50
综述 VEGF-A 在肿瘤中的研究进展  50-66
  参考文献  60-66
致谢  66-67
个人简历  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 肿瘤学实验研究 > 治疗实验
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