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VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3与非小细胞肺癌淋巴转移关系的研究

作　者: 常超
导　师: 王平；曹毅；彭浩
学　校: 昆明医学院
专　业: 外科学
关键词: 血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子-D 血管内皮生长因子受体-3 非小细胞肺癌淋巴转移
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

浸润与转移是恶性肿瘤的重要生物学特性,经血循环和淋巴道播散是肿瘤转移的两条重要途径,淋巴管是实体肿瘤转移的最早通路之一,但与肿瘤血管相比,对肿瘤淋巴管的研究甚少。近年,随着淋巴管生成因子-C(vascular endothelialgrowth factor-C,VEGF-C)、淋巴管生成因子-D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D)以及多种淋巴管内皮特异性标志物,如淋巴管透明质酸受体-1(1ymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1,LYVE-1)、血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)、肾小球足突膜蛋白(glomerular podocte membrance mucoproton,podoplanin)和同源异型盒转录因子(the homeobox transcription factor,Prox-1)等先后被鉴定,淋巴管生成已成为肿瘤转移研究领域的热点之一。实验肿瘤转移动物模型的研究表明:VEGF-C和VEGF-D诱导肿瘤相关淋巴管生成在促进恶性肿瘤淋巴结转移中发挥重要作用,抗淋巴管生成有望成为抗肿瘤治疗的新方法。人类肿瘤淋巴管生成的机制和临床意义已在乳腺癌、黑色素瘤和头颈癌等多种实体瘤中有报道。研究表明,VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达与多种肿瘤的淋巴结转移密切相关。但包括非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)在内的一些肿瘤,关于VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达与淋巴结转移的关系尚存在争议。其焦点主要在于:一是瘤内是否存在功能性淋巴管?二是在肿瘤转移过程中,是瘤内还是肿瘤周边的淋巴管生成起主要作用?目前,对NSCLC淋巴管生成领域的研究多集中在VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达与淋巴结转移和预后的关系上,很少有研究瘤内、肿瘤周边淋巴管生成与预后的关系。深入探讨NSCLC淋巴管生成的机制及意义,为临床抗淋巴管生成治疗提供实验依据。目的探讨淋巴管生成因子前蛋白转换酶(proprotein convertase,PC)5、7,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-C、-D及其受体3(VEGFR-3)在NSCLC中的表达规律、与微淋巴管密度(microlymphatic vesseldensiy,MLVD)及淋巴转移之间的关系及其在NSCLC发生发展、预后中的意义。探讨淋巴管标记物淋巴管内皮透明质酸受体-1(1ymphatic vessel endothelialhyaluronan togeptor-1,LYVE-1)、同源异型盒转录因子(the homeobox transcriptionfactor,Prox-1)在NSCLC中的表达规律、与MLVD及淋巴转移之间的关系及其在NSCLC发生发展、预后中的意义。方法我们采用实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative reversetranscriptase polymerase chain reaction,real-time quantitative RT-PCR)技术对2007年10月至2008年6月在云南省第一人民医院胸心外科接受手术治疗的NSCLC患者的组织标本VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、PC5、PC7 mRNA的表达进行定量分析。采用免疫组织化学染色法(immunohistochemistry,IHC)对VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、LYVE-1、Prox-1蛋白的表达进行定性分析,并计数微淋巴管密度。结果1.实时荧光定量RT-PCR结果显示NSCLC组织中PC5、PC7、VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3 mRNA的表达量均明显高于肿瘤周边组织(距肿瘤边缘100μm区域内)及肺良性病变组织,与NSCLC的淋巴结转移、PTNM分期显著相关。PC5、PC7与VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3 mRNA表达存在正相关性。2.免疫组织化学染色法结果显示VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白免疫组化阳性表达定位于肿瘤细胞及巨噬细胞的胞浆,呈棕黄色颗粒,VEGFR-3还可见于细胞间质脉管内皮细胞。LYVE-1蛋白阳性表达定位于淋巴管内皮细胞的胞浆,Prox-1蛋白阳性表达定位于淋巴管内皮细胞的胞核。NSCLC组织中VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3蛋白的阳性率明显高于肿瘤周边组织及肺良性病变组织,与NSCLC的淋巴结转移、PTNM分期显著相关。146颗淋巴结的免疫组织化学染色结果显示,在有转移的淋巴结组织中,VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3蛋白的阳性率显著高于无转移的淋巴结组织。相关分析显示VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3蛋白与淋巴结转移均存在相关性。NSCLC肿瘤周边组织LYVE.1及Prox-1标记的MLVD明显高于肿瘤中心部位及肺良性病变组织。VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3阳性表达的NSCLC组织,其周边部位中LYVE-1、Prox-1标记的MLVD显著高于VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3阴性表达组织,并且,MLVD与肿瘤的淋巴结转移、PTNM分期显著相关。3.综合分析实时荧光定量RT-PCR及免疫组织化学染色的实验结果显示,在基因水平,VEGF-C与VEGF-D、VEGF-C与VEGFR-3及VEGF-D与VEGFR-3mRNA的表达均存在相关性;在蛋白水平,VEGF-C与VEGFR-3、VEGF-D与VEGFR-3蛋白表达存在相关性,而VEGF-C与VEGF-D蛋白表达无相关性;VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3 mRNA与其相应蛋白之间的表达均存在正相关性。结论1.淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3 mRNA及蛋白在NSCLC组织中的表达显著增高,并且通过VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信号通路诱导淋巴管内皮细胞新生和淋巴管生成,从而促进淋巴结转移和肿瘤生长。2.淋巴管内皮细胞特异性标志物LYVE-1、Prox-1可以较严格地区分血管和淋巴管内皮,相对精确地评价肿瘤的脉管系统。与肿瘤淋巴转移相关的有功能的淋巴管主要位于肿瘤周边部位,而非肿瘤中心部位。3.淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3及淋巴管内皮标记物LYVE-1与Prox-1可能成为检测NSCLC淋巴转移和评估预后的重要分子指标。

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英文缩略词  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
引言  13-18
论文正文 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3与非小细胞肺癌淋巴转移关系的研究  18-75
  第一部分 PC5、PC7、VEGF-C、D及其受体VEGFR-3 mRNA在非小细胞肺癌淋巴转移中的表达及意义  18-41
    前言  18
    材料与方法  18-25
    结果  25-29
    讨论  29-32
    结论  32-33
    附图  33-41
  第二部分非小细胞肺癌VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表达与淋巴管生成和淋巴转移关系的研究  41-75
    前言  41
    材料和方法  41-45
    结果  45-51
    讨论  51-56
    结论  56-57
    附图  57-68
    全文结论  68-69
    参考文献  69-75
文献综述淋巴管生成的分子机制与恶性肿瘤的淋巴转移  75-85
  参考文献  82-85
研究生期间撰写及发表文章  85-86
致谢  86

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