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N-（3-三氟甲基苯基）维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞分化、凋亡和骨桥蛋白表达的影响及其机制探讨

作　者: 程英
导　师: 桂淑玉；汪渊
学　校: 安徽医科大学
专　业: 内科学
关键词: 肺肿瘤细胞增殖/药物作用细胞分化/药物作用骨桥蛋白 ERK1/2 PMA PD98059
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨新合成的全反式维甲酸（ATRA）衍生物[N-（3-三氟甲基苯基）维甲酰胺,NTFMP]对人肺腺癌细胞株A549体外增殖、分化、凋亡及骨桥蛋白表达的影响;并初步探讨调控骨桥蛋白表达的分子机制。方法⒈以人肺腺癌细胞株A549为研究对象,分别给予不同浓度的ATRA及NTFMP进行干预,应用:①四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法测定A549细胞的增殖情况;②酶动力学法检测该药对A549细胞分泌癌胚抗原（CEA）的影响;③光学显微镜观察A549细胞形态变化;④Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(ERK_1/2)蛋白及骨桥蛋白（OPN）表达的变化。⒉以7.5mg/L的NTFMP处理A549细胞3d后,加入ERK_1/2激动剂佛波醇酯（PMA）或PMA与ERK_1/2抑制剂（PD98059）,在0min,5min,10min,45min,2hour时观察细胞形态拍照,并分别提取蛋白,采用Western blot检测凋亡蛋白、ERK_1/2的磷酸化水平及OPN蛋白表达。结果NTFMP能够显著抑制A549细胞增殖,抑制率随药物浓度增加而增高,呈浓度依赖性;并诱导细胞分化、凋亡,使代表肺癌细胞恶变的CEA分泌量明显下降（P<0.05）;在光镜下细胞数量明显减少,细胞形态由梭形变为不规则形,细胞不重叠,呈单层;Western blot结果显示:①凋亡蛋白表达:药物处理组的抑凋亡蛋白Bcl-2、NF-κB表达明显下降（P<0.05）,而促凋亡蛋白Bax在药物处理组表达升高,Bak、P53、Caspase-3及Caspase-9表达未见明显变化;②OPN表达检测:7.5mg/L的NTFMP处理A549细胞ERK_1/2的磷酸化水平及OPN的表达量明显下降,ERK_1/2未见变化;在NTFMP处理细胞基础上用PMA刺激5min后,A549细胞ERK_1/2磷酸化水平及OPN蛋白表达量均明显提高（P<0.05）,PMA和PD98059同时刺激5min后ERK_1/2磷酸化和OPN蛋白表达明显低于单用PMA作用。此种现象一直持续到45min时都比较明显,以10min时最明显。此后随着刺激时间的不断延长,PMA的刺激作用有所减弱,表现为PD98059抑制作用为主。结论NTFMP对A549细胞具有促进分化、诱导凋亡、抑制增殖作用;其机制可能与下调A549细胞ERK_1/2磷酸化水平进而抑制OPN的表达相关。

全文目录

中英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
材料和方法  11-19
结果  19-26
讨论  26-31
结论  31
参考文献  31-33
对课题的进一步设想  33-35
附录  35-37
  个人简历  35-37
致谢  37-38
综述骨桥蛋白与肺癌关系的研究进展  38-49
  参考文献  46-49

N-（3-三氟甲基苯基）维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞分化、凋亡和骨桥蛋白表达的影响及其机制探讨

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