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α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞作用的研究

作　者: 高文
导　师: 段斐
学　校: 河北大学
专　业: 药理学
关键词: 绝经后骨质疏松症 α-玉米赤霉醇 Bax/Bcl-2 细胞培养
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的通过观察植物雌激素α玉米赤霉醇（α-ZAL）对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的作用,研究植物雌激素α-玉米赤霉醇对大鼠成骨细胞增殖、分化及蛋白表达的影响,探讨植物雌激素α-玉米赤霉醇在骨代谢中的作用机理,以期为骨质疏松防治药物的研究开阔思路。方法1.采用二次酶消化法分离培养新生（24h）SD乳鼠颅盖骨成骨细胞。2.应用钙钴法碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红矿化结节染色来鉴定成骨细胞。3.应用噻唑兰（MTT）法测定植物雌激素α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖的影响。4.采用对硝基苯二钠基质动力学法检测了24 h和48h成骨细胞碱性磷酸酶活性的改变。5.采用免疫组化法观察α玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的Bax、Bcl-2表达的影响。结果1.细胞形态学观察:刚接种的原代成骨细胞呈球形,24h内存活细胞已沉降贴壁,培养第2天能够完全展开,呈三角形、梭形,核明显增大;传代培养5天,细胞形态可见多样化,胞浆丰富,向外伸展,伸出多个伪足,与周围细胞的伪足相互连结,细胞半融合;培养一周左右,可见长索形、多角形、条索形,汇合时细胞呈铺路石状,可重叠生长。2.成骨细胞的鉴定:ALP染色可见90%细胞染色阳性,胞质中出现灰黑色颗粒或块状沉积,矿化结节呈橘红色结节、边界清晰,可证明为成骨细胞。3.对大鼠成骨细胞增殖的影响:大鼠成骨细胞在含有不同浓度(10-5mol/L10-10mol/L)α玉米赤霉醇以及含有10-10mol/L的雌二醇和无药物的培养基中培养24h后,与E2组比较,α-ZAL 10-7mol/L、α-ZAL 10-10mol/L这两种浓度差异无显著性（P> 0.05）,说明这两种浓度有促进成骨细胞增殖的作用4.对大鼠成骨细胞外碱性磷酸酶活性的影响:与正常组比较,三组均有显著性差异,与E2组比较,α-ZAL 10-7mol/L、α-ZAL 10-10mol/L这两种浓度差异无显著性（P> 0.05）,说明这两种浓度均可以促进成骨细胞分泌ALP。在促进成骨细胞分泌ALP的过程中,随着用药天数的增加,ALP含量也增加。5.α-ZAL对Bcl-2,Bax蛋白表达分析的影响:α-ZAL(10-7mol/L)组、α-ZAL （10-10mol/L）组抑制成骨细胞凋亡的作用。结论1.一定浓度的α-玉米赤霉醇可以促进成骨细胞的增殖分化,说明它们对骨都具有雌激素样活性。2.Bax/Bcl-2参与成骨细胞的凋亡过程,一定浓度的α-玉米赤霉醇可以通过调节Bax/Bcl-2起到关键调控作用。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-11
第一章 文献综述  11-25
  1 前言  11
  2 绝经后骨质疏松症  11-13
  3 雌激素与绝经后骨质疏松症  13
  4 雌激素与成骨细胞  13-15
  5 雌激素受体(estrogen receptor，ER)与绝经后骨质疏松症  15-16
  6 绝经后骨质疏松症的其它发生机制  16
  7 植物雌激素  16-19
  8 新的植物雌激素-α-玉米赤霉醇(α-ZAL)  19-21
  参考文献  21-25
第二章 α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的影响  25-45
  1 材料  25-28
    1.1 实验动物  25-26
    1.2 药物与试剂  26-27
    1.3 仪器  27
    1.4 主要试剂的配制  27-28
  2. 方法  28-32
    2.1 新生大鼠颅骨成骨细胞的分离培养  28-29
    2.2 成骨细胞的纯化  29
    2.3 成骨细胞的鉴定  29-31
      2.3.1 成骨细胞形态学鉴定  29-30
      2.3.2 碱性磷酸酶(ALP)染色（采用改良钙钴法染色）  30
      2.3.3 茜素红矿化结节染色的观察  30-31
    2.4 成骨细胞增殖活性检测（MTT 法）  31
    2.5 成骨细胞ALP 含量测定  31
    2.6 Bcl-2，Bax 蛋白表达分析(免疫组化)  31-32
    2.7 统计分析  32
  3 结果  32-39
    3.1 成骨细胞形态学观察  32-33
    3.2 碱性磷酸酶(ALP)改良钙钴法染色  33-34
    3.3 茜素红钙结节染色  34-35
    3.4 α-ZAL 对成骨细胞增殖的影响  35-36
    3.5 α-ZAL 对成骨细胞外ALP 活性的影响  36-37
    3.6 α-ZAL 对Bcl-2，Bax 蛋白表达分析的影响  37-39
  4. 讨论  39-43
  参考文献  43-45
创新点  45-46
致谢  46

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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