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舒洛地特对高糖诱导下大鼠腹膜间皮细胞纤维化的作用

作　者: 戢晴
导　师: 林沁
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 舒洛地特腹膜间皮细胞高糖转化生长因子-β1 Smad2 α-平滑肌肌动蛋白结缔组织生长因子
分类号: R459.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】本课题旨在观察舒洛地特(sulodexide, SLX)对高糖体外诱导大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells, RPMCs)纤维化的作用,并探讨SLX对高糖诱导下腹膜间皮细胞纤维化的可能作用机制。【方法】大鼠脏层腹膜胰酶消化法原代培养RPMCs,倒置相差显微镜观察细胞形态、扫描电镜及透射电镜鉴定;通过四甲基偶氮唑蓝(methylthiazoly tetrazolium, MTT)试验确定SLX的安全剂量,第2代RPMCs用于实验,设为空白对照组、4.25%葡萄糖组、4.25%葡萄糖+低剂量SLX(50μg/ml)组、4.25%葡萄糖+中剂量SLX(400μg/ml)组、4.25%葡萄糖+高剂量SLX(800μg/ml)组。培养48h通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)技术检测转化生长因子(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、Smad2、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)及α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)mRNA表达情况,采用免疫细胞化学方法检测α-SMA蛋白表达情况,并通过积分光密度(integrated optical density, IOD)测定进行半定量分析。所用实验至少重复3次。【结果】1.细胞鉴定:双目倒置相差显微镜下,RPMCs为多角形细胞,呈铺路石样生长。扫描电镜下可见细胞表面存在大量的微绒毛。透射电镜可见细胞浆内有丰富的粗面内质网、线粒体及高尔基小体,未见Weibel palade小体。2.细胞毒性试验:不同浓度SLX(0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)干预RPMCs 48 h后,各浓度之间细胞死亡率差异无统计学意义,因此认为本实验中舒洛地特剂量对RPMCs无毒性。3.与空白对照组相比,高糖刺激组RPMCs TGF-β1 mRNA及Smad2 mRNA表达上调(P<0.05),SLX可降低高糖条件下培养的RPMCs TGF-β1 mRNA表达(P<0.05),低剂量组和中、高剂量组之间有统计学差异(P<0.05)。中剂量组和高剂量组之间没有统计学差异(P>0.05)。4. RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,高糖刺激组RPMCs CTGF mRNA及α-SMA mRNA表达上调(P<0.05),SLX可降低高糖条件下培养RPMCs的CTGF mRNA及α-SMA mRNA表达(P<0.05),低剂量组和中、高剂量组之间有统计学差异(P<0.05)。中剂量组和高剂量组之间没有统计学差异(P>0.05)。5.免疫细胞化学结果显示,与空白对照组相比,高糖刺激组RPMCsα-SMA蛋白表达上调(P<0.05),SLX可降低高糖条件下培养的RPMCsα-SMA蛋白表达(P<0.05),低剂量组和中、高剂量组之间有统计学差异(P<0.05)。中剂量组和高剂量组之间没有统计学差异(P>0.05)。【结论】1. SLX在体外可明显抑制高糖诱导的RPMCs TGF-β1、Smad2、CTGF的高表达。2. SLX在体外通过减轻高糖诱导的RPMCs向肌成纤维细胞表型转化,抑制腹膜纤维化的发生。提示SLX具有抑制腹膜纤维化的生物学功能,为临床防治PD相关的腹膜纤维化提供理论依据和新的治疗思路。

舒洛地特对高糖诱导下大鼠腹膜间皮细胞纤维化的作用

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