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硫化氢介导的大鼠大脑中动脉EDHF舒张反应及其在脑缺血再灌注过程中的变化

作　者: 周方杰
导　师: 陈志武
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药理学
关键词: 内皮源性超极化因子 大脑中动脉 血管舒张 钙激活钾通道 硫化氢 局灶性脑缺血再灌注
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


生理状况下,血管内皮通过生成和释放内皮源性的舒张因子,如一氧化氮（nitric oxide, NO）、前列环素（prostacyclin, PGI2）及内皮源性超极化因子（endothelium-derived hyperpolarizing factor, EDHF）,在维持血管稳态方面起着重要的作用。它们和内皮素﹑血栓素A2 （TXA2）等血管收缩因子共同作用,调节血管局部的紧张程度和血流量,其中NO和PGI2发现较早,其性质和作用机制均得到广泛而且深入的研究,但有关EDHF,尤其是EDHF在脑血管中的作用研究还很少。硫化氢（H2S）长期以来一直是被看成是对机体有害的气体分子。研究表明H2S是机体气体信号家族中的重要的一员,与NO、一氧化碳（CO）一起被称为“三人执政”。在哺乳动物细胞中,合成H2S的酶主要有胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-β-synthase, CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase, CSE）。现普遍认为CSE是心血管系统中产生H2S的唯一的酶。在血管中,CSE不仅在血管平滑肌细胞中表达,在血管内皮细胞中也有表达。本文现对H2S在大鼠大脑中动脉（middle cerebral artery, MCA）中是否具有EDHF样作用进行了研究。目的:1.探讨H2S是否介导大鼠MCA中EDHF舒张反应。2.探讨脑缺血再灌注大鼠MCA中EDHF舒张反应的变化。方法:1.采用离体血管舒缩功能测定实验方法,检测乙酰胆碱（ACh）﹑硫氢化钠（NaHS）、L-半胱氨酸（L-Cys）等对大鼠离体MCA的舒张作用,并分别观察四乙胺(TEA, 1×10-3 mol/L)对NaHS舒张大鼠MCA作用的影响及去内皮和DL-炔丙基甘氨酸(PPG, 1×10-4mol/L)对L-Cys舒张大鼠MCA作用的影响。血管用一氧化氮（NO）合酶抑制剂(L-NAME,3×10-5 mol/L)和前列环素（PGI2）合酶抑制剂(Indo,1×10-5 mol/L)预处理后,用ACh诱导血管产生非NO、非PGI2舒张反应,并分别观察TEA(1×10-3 mol/L)或PPG(1×10-4mol/L)对这种非NO、非PGI2舒张反应的影响。2.运用胶原酶Ⅱ等消化大鼠MCAs获取混合细胞悬液,磁珠分离法（magnetic cell separation system）分离纯化大鼠MCAs内皮细胞,采用RT-PCR的方法检测正常大鼠MCAs内皮细胞中内源性H2S合酶—CSEmRNA的表达。3.采用线栓法复制局灶性脑缺血（MCAO）再灌注损伤模型,观察大鼠神经功能缺陷,检测脑梗死体积和脑组织中H2S含量的变化及EDHF介导的血管舒张反应的变化。并用RT-PCR的方法检测脑缺血再灌注过程中CSEmRNA的表达的变化。结果:1.在KCl （30 mmol/L）预收缩的大鼠MCA环上, ACh (10-7～10-4.5 mol/L)可浓度依赖性舒张大鼠MCA,血管用L-NAME (3×10-5mol/L)和Indo (10-5 mol/L)预处理后, ACh对MCA仍具有舒张作用。但钙激活钾通道(KCa通道)阻断剂四乙胺(TEA, 1×10-3 mol/L)或CSE（内源性H2S合酶）抑制剂PPG(1×10-4 mol/L)可明显取消这种MCA的舒张。NaHS (10-5～10-2.5 mol/L,H2S供体)也可浓度依赖性舒张MCA,但可被1×10-3 mol/L TEA显著地抑制;L-Cys (10-5～10-2.5 mol/L,CSE底物)也可诱导MCA舒张,但PPG(1×10-4 mol/L)或去除血管内皮可显著抑制L-Cys的这种舒张作用。。2.采用磁珠分离法分离纯化得到大鼠MCAs内皮细胞,运用RT-PCR的方法检测结果显示大鼠MCAs内皮细胞上有CSEmRNA条带的表达。3.在脑缺血再灌注损伤中,大鼠MCA中EDHF介导的舒张反应明显增强,大鼠MCA内皮细胞中CSEmRNA表达上调,大鼠脑组织H2S含量显著增多。结论:1.在大鼠MCA中,ACh诱导的非NO、非PGI2舒张反应,即EDHF反应可能是H2S介导的。2.脑缺血再灌注大鼠MCA中EDHF介导的舒张反应明显增强。

全文目录


英文缩略词表（abbreviation）  6-8
中文摘要  8-11
英文摘要  11-14
1. 前言  14-16
2. 实验材料  16-18
  2.1 实验动物  16
  2.2 药品与试剂  16-17
  2.3 仪器与设备  17-18
3. 实验模型与方法  18-27
  3.1 离体血管舒缩功能测定实验  18-21
  3.2 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型  21-22
  3.3 局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中H_2S 含量的测定  22-23
  3.4 免疫磁珠法分离纯化大鼠大脑中动脉内皮细胞  23-24
  3.5 RT-PCR 方法检测大鼠大脑中动脉内皮细胞中CSE mRNA 的表达  24-27
  3.6 统计学方法  27
4. 实验结果  27-38
  4.1 H_2S 与EDHF 介导的大鼠MCA 的舒张反应的关系  27-35
    4.1.1 ACh诱导的大鼠MCA的非NO、非PGI_2反应  27-29
    4.1.2 TEA 对大鼠MCA非NO 非PGI_2反应的影响  29-30
    4.1.3 PPG对大鼠MCA非NO非PGI_2介导舒张反应的影响  30-31
    4.1.4 NaHS对大鼠MCA的舒张作用  31-32
    4.1.5 TEA 对NaHS 舒张大鼠MCA 作用的影响  32-33
    4.1.6 L-Cys舒张大鼠MCA作用及PPG对其作用的影响  33-34
    4.1.7 血管内皮对L-Cys舒张大鼠MCA作用的影响  34-35
  4.2 大鼠 MCA 内皮细胞中 CSE mRNA 的表达  35-36
  4.3 脑缺血再灌注大鼠 MCA 中的 EDHF 介导反应的变化  36-38
    4.3.1 脑缺血再灌注大鼠神经功能缺陷评分和脑梗死体积百分比  36-37
    4.3.2 脑缺血再灌注大鼠脑组织 H_2S 含量  37
    4.3.3 脑缺血再灌注大鼠 MCA 中的 EDHF 舒张反应的变化  37-38
    4.3.4 脑缺血再灌注大鼠 MCA 内皮细胞中 CSE mRNA 表达的变化  38
5. 讨论  38-43
6. 结论  43-44
参考文献  44-50
附录  50-51
致谢  51-52
综述  52-61
  参考文献  59-61

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学
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