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聚左旋乳酸/壳聚糖纳米纤维三维多孔支架复合骨髓间充质干细胞修复骨缺损的实验研究

作　者: 苗贵强
导　师: 查振刚
学　校: 暨南大学
专　业: 外科学
关键词: 骨髓间充质干细胞骨缺损壳聚糖纳米纤维聚左旋乳酸多孔支架骨组织工程
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的将聚左旋乳酸/壳聚糖纳米纤维(ploly-L-lactic acid/chitosan nanofibers, PLLA/CSNF)三维多孔支架,复合来源于新西兰大白兔并分离培养的骨髓间充质干细胞(bonemesenchymal stem cells, BMSCs),评价PLLA/CSNF与兔BMSCs的体外相容性、体内组织相容性的效果。将体外制作细胞-支架复合物并植入兔股骨髁缺损处,以评价其修复局部骨缺损的效果,初步探讨一种新的治疗骨缺损的组织工程学方法。方法1、全骨髓贴壁法分离、培养兔BMSCs。2、用成骨诱导液将BMSCs向成骨细胞定向诱导分化,了解所分离培养的BMSCs骨向分化能力。3、BMSCs分别复合PLLA和PLLA/CSNF并进行联合培养,并进行扫描电镜观察比较此两种支架的细胞相容性。4、PLLA/CSNF多孔支架植入兔皮下,于术后第1,2,4周取出材料,大体观察、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色和扫描电镜观察材料的组织相容性。5、制作兔股骨髁部骨缺损模型,分四组实验,实验组缺损处植入PLLA/CSNF/BMSCs复合物、标准组植入自体骨、对照组植入单纯PLLA/CSNF、空白组不做处理,术后第4、8、12周取材,通过大体观察、放射学检查、组织学检查和扫描电镜观察等方法评价其修复缺损情况。结果1、全骨髓贴壁法能够获得兔BMSCs,且BMSCs可在体外进行分离扩增诱导成骨分化。经扫描电镜观察显示BMSCs在支架材料上较好的粘附生长。2、复合材料PLLA/CSNF植入皮下后无明显组织排斥反应,HE染色未见明显炎症和排斥反应,显示了良好的组织相容性。3、实验组的缺损处有骨组织生成,支架材料降解,修复情况接近标准组；对照组有少量骨组织形成,材料部分降解；空白组缺损处无新生骨组织生成,主要由纤维结缔组织填充。结论1、全骨髓贴壁法可获得兔BMSCs,可在体外长期、稳定的培养,并且可在体外向成骨细胞诱导分化,是理想的组织工程种子细胞。2、PLLA/CSNF多孔支架具有较好的细胞和组织相容性,可在体内逐渐降解。3、PLLA/CSNF多孔支架复合兔BMSCs可加速新骨形成,达到修复兔股骨髁部骨缺损的目的,是一种良好的骨组织工程生物支架材料。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
1 绪论  10-18
  1.1 骨组织工程学概论  10-11
  1.2 支架材料概论  11-13
  1.3 本实验所用材料概论  13-15
  1.4 种子细胞概论  15-17
  1.5 本课题的研究思路  17-18
2 实验一 BMSCs的分离、培养和鉴定  18-27
  2.1 研究目的  18
  2.2 实验材料  18-19
  2.3 实验方法  19-22
  2.4 结果  22
  2.5 讨论  22-24
  2.6 结论  24-25
  2.7 附图  25-27
3 实验二聚左旋乳酸/壳聚糖纳米纤维复合三维多孔支架的构建与生物相容性研究  27-40
  3.1 研究目的  27
  3.2 实验材料  27
  3.3 实验方法  27-29
  3.4 统计学分析  29
  3.5 结果  29-32
  3.6 讨论  32-34
  3.7 结论  34-35
  3.8 附图  35-40
4 实验三 PLLA/CSNF多孔支架复合BMSCs修复兔股骨髁部骨缺损  40-54
  4.1 研究目的  40
  4.2 实验材料  40-41
  4.3 实验方法  41-42
  4.4 结果  42-44
  4.5 讨论  44-45
  4.6 结论  45-46
  4.7 附图  46-54
5 读研期间发表论文  54-55
6 英文缩略词  55-56
7 参考文献  56-60
致谢  60

聚左旋乳酸/壳聚糖纳米纤维三维多孔支架复合骨髓间充质干细胞修复骨缺损的实验研究

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