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Choukroun\'s 富血小板纤维蛋白（PRF）促进牙龈软组织修复再生的实验研究

作　者: 倪宇昕
导　师: 周延民
学　校: 吉林大学
专　业: 口腔医学
关键词: Choukroun富血小板纤维蛋白(Choukroun’s PRF) 软组织美学牙龈成纤维细胞 Ⅰ型胶原透明质酸
分类号: R783.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究背景及目的:目前种植义齿已广泛应用于临床,种植义齿已成为公认的修复牙齿与牙列缺失的最佳方法。随着种植技术的成熟,种植体与牙槽骨的骨性结合不再是种植治疗成功与否的唯一标准,美学效果已成为种植修复成功的必备条件之一。目前,临床上有多种常用的软组织处理方法,不仅手术方法较为复杂,对术者要求很高,而且术后效果不稳定,并给患者造成多次手术的痛苦。1984年,Assoian首次制备了富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP),被大量实验室及临床试验证实具有良好的促进软组织及骨组织修复再生的作用。然而,由于PRP制作过程中加入人工制剂,有可能作为抗原引起人免疫排斥反应,严重者可引起危及生命的凝血病,并且其制作过程复杂,缺乏统一的制作标准,在临床的应用受到一定限制。2000年Choukroun等首次发现新一代血小板浓缩物PRF,不添加任何人工制剂,很好地避免了免疫排斥和交叉感染的发生。PRF富含多种生长因子,并经过缓慢自然的聚合,模拟生理状态下血凝块中纤维蛋白的形成过程,与人体正常凝血块中的纤维蛋白相似。这种特殊的结构与多种生长因子有较强的亲和力,从而使生长因子缓慢释放,延长其作用时间。近期,越来越多的文献表明PRF能够缩短牙龈等软组织愈合的时间,提高牙龈生成质量及厚度,可能是改善种植义齿软组织美学的一条新途径。本实验的目的是根据PRF特殊的成分及结构,通过观察PRF对人牙龈成纤维细胞的生物学行为的影响,评估PRF在牙龈软组织修复再生中的作用,以推广PRF在种植义齿美学修复中的临床应用,并为其应用提供理论指导。实验方法:本实验采取人健康牙龈组织进行原代培养,通过形态学及免疫学鉴定,细胞生长曲线的绘制,鉴定细胞性质。取人静脉血2ml制备PRF膜,选用4-7代细胞进行PRF与人牙龈成纤维细胞的共培养,分为空白对照组(对照组)、1块PRF组(P1组)、2块PRF组(P2组),MTT法检测1、3、5天细胞增殖情况, ELISA法检测培养上清液的COL-Ⅰ及HA含量, SPSS 17.0统计学软件进行统计分析。实验结果:人牙龈成纤维细胞的原代培养可见,呈长梭形,胞浆丰满,胞核圆形,核仁明显。抗波形蛋白染色呈阳性,胞浆棕黄色着色,抗角蛋白染色呈现阴性,符合成纤维细胞的特征。细胞生长曲线符合一般细胞的“滞缓-对数生长-平台”的生长规律。PRF与牙龈成纤维细胞共培养细胞增殖实验结果为:第1天,对照组<P1组<P2组(P<0.05),第3天,对照组小于P1、P2组(P<0.05),P1组P2组间无明显差异(P>0.05),第5天,对照组小于P2组(P<0.05),P1组与各组间无明显差异(P>0.05)。对培养上清液中COL-Ⅰ的ELISA分析结果为:第一天,对照组<P1组,P2组(P<0.05),P1、P2组间无明显差异(P>0.05)。第3、第5天对照组<P1组<P2组(P<0.05)。对培养上清液中HA的ELISA分析结果:第1、第3天,对照组<P1组<P2组(P<0.05),第五天对照组,P1组<P2组(P<0.05),对照组及P1组间无明显差异(P>0.05)。结论:1.PRF具有促进人牙龈成纤维细胞增殖的作用,并表现出一定的剂量依赖性。2.PRF能够促进人牙龈成纤维细胞分泌COL-Ⅰ及HA,并具有明显的剂量依赖性,在组织修复中具有积极作用。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-13
第1章引言  13-16
第2章综述  16-25
  2.1 PRP 对软组织愈合影响的研究  16-18
    2.1.1 PRP 制取方法及组成结构  16
    2.1.2 PRP 的作用机理  16-17
    2.1.3 PRP 促进软组织愈合的相关研究  17-18
  2.2 PRF 对软组织愈合影响的研究  18-20
    2.2.1 PRF 的制取方法及组成结构  18
    2.2.2 PRF 的作用原理  18-19
    2.2.3 PRF 促进软组织愈合的相关研究  19-20
  2.3 结论与展望  20-25
第3章牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定  25-32
  3.1 材料与方法  25-27
    3.1.1 主要试剂、器材  25-26
    3.1.2 正常人牙龈成纤维细胞的培养和鉴定  26-27
  3.2 结果  27-29
    3.2.1 细胞培养与鉴定  27-28
    3.2.2 细胞生长曲线  28-29
  3.3 讨论  29-30
  3.4 小结  30-32
第4章 PRF 对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响  32-43
  4.1 材料与方法  32-34
    4.1.1 主要试剂、器材  32
    4.1.2 实验方法  32-34
  4.2 结果  34-37
    4.2.1 细胞增殖实验结果  34-35
    4.2.2 PRF 对人牙龈成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的影响  35-36
    4.2.3 PRF 对人牙龈成纤维细胞透明质酸（HA）表达的影响  36-37
  4.3 讨论  37-42
    4.3.1 牙龈组织修复的过程  37-38
    4.3.2 PRF 的制备及生物学特性  38-39
    4.3.3 PRF 对牙龈成纤维细胞的生物学行为的影响  39-42
  4.4 小结  42-43
第5章典型临床病例报告  43-45
第6章结论  45-46
参考文献  46-51
作者简介及在学期间所取得的科研成果  51-52
致谢  52-53

Choukroun\'s 富血小板纤维蛋白（PRF）促进牙龈软组织修复再生的实验研究

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