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蛋白酶体抑制剂MG-132作用下失神经骨骼肌myf-5的表达

作　者: 阎少君
导　师: 王东
学　校: 山西医科大学
专　业: 外科学
关键词: Myf-5 去神经支配肌萎缩 SD大鼠蛋白酶体抑制剂
分类号: R683
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 4次
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内容摘要

目的探讨去神经骨骼肌使用蛋白酶体抑制剂MG-132后骨骼肌成肌调节因子Myf-5的表达情况。方法取SD大鼠54只,随机分成3组,即A组：空白对照组；B组：去神经组；C组：去神经MG-132干预组；每组18只。A组不切断坐骨神经,仅作假手术；B组和C组全部制作成标准的右侧坐骨神经离断,腓肠肌失神经支配模型,并在C组大鼠失神经腓肠肌局部多点注射浓度为20μmol、L的蛋白酶体抑制剂MG-132 100μL,1次/d。分别于去神经第2d、7d、28d,用脊椎脱臼法处死大鼠,解剖并分离出右小腿的腓肠肌,切取肌肉标本置于-80℃冰箱冻存,留待28 d后统一检测。用RT-PCR法检测Myf-5的mRNA:以GAPDH作为内参照,做半定量检测。取样本组织50mg匀浆后用抽提试剂进行总RNA抽提,然后用MBI的RT-PCR试剂盒,按样本RNA2μg,20μl体系进行反转录。Myf-5的引物通过primer5.0引物设计软件设计,其上游引物：5’-TGC CAT CCG CTA CAT TGA GAG-3’,下游引物：5’-CCG GGG TAG CAG GCT GTG AGT TG-3’,作为内参照的GAPDH的引物由山西医科大学实验中心提供,其上游引物：5’-TCC CTC AAG ATT GCT AGC AA-3′,下游引物：5’-AGA TCC ACA ACG GAT ACA TT-3’,共308bp。反转录聚合酶链反应按50μl体系,反应条件为：96℃,2’,1cycle.96℃,30"；Tm(Myf-5 53℃)/(GAPDH 50℃),30"；72℃,2’；36 cycle.Western-blot检测Myf-5蛋白表达的变化,并用SPSS13.0软件进行统计分析。结果去神经组与去神经MG-132干预组Myf-5的mRNA和蛋白质在去神经支配后第2d7d、28d均表达上调与空白对照组比较都有统计学差异(P<0.01)；去神经组与去神经MG-132干预组Myf-5的mRNA和蛋白质在去神经支配后第2d、7d、28d的比较有统计学差异(P<0.01)。结论在骨骼肌失神经后,蛋白酶体抑制剂MG-132可以通过抑制泛素-蛋白酶体途径来上调Myf-5的表达,从而起到延缓骨骼肌萎缩的作用。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-8
英文缩写词表  8-9
论文  9-26
  前言  9-13
  材料与方法  13-20
  结果  20-22
  讨论  22-23
  结论  23-24
  参考文献  24-26
综述  26-31
  正文  26-28
  参考文献  28-31
个人简介  31-32
致谢  32

蛋白酶体抑制剂MG-132作用下失神经骨骼肌myf-5的表达

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