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不同浓度瘦素对乳鼠成骨细胞增殖及VEGFmRNA表达的影响

作　者: 贺晋栋
导　师: 王东
学　校: 山西医科大学
专　业: 外科学
关键词: 瘦素成骨细胞成骨细胞增殖血管内皮生长因子血管化
分类号: R683
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的骨损伤后的临床治疗长久以来一直是广大学者研究的热点。而成骨细胞的增殖和新生血管的生成对于骨损伤后的骨修复和骨再生过程起到了至关重要的作用。目前认为,瘦素(Leptin)可参与体内多种代谢诸如骨代谢等多方面的调节。而血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)既可以促进血管新生,同时又具有骨生长因子的特性。近年来在国内外与癌症相关的一些试验中证明,瘦素可上调VEGF的表达,并呈剂量依赖性,但在成骨细胞方面的研究尚未见。本实验拟通过观察不同浓度瘦素对离体培养乳鼠颅骨成骨细胞的作用,探讨瘦素对成骨细胞增殖以及成骨细胞上血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。为骨损伤后的骨修复、再生的临床治疗提供一定的理论依据。方法取新生24h乳鼠颅盖骨,经酶解消化后得到原代成骨细胞,进行体外培养,经碱性磷酸酶(ALP)和矿化结节染色(茜素红法)后鉴定为成骨细胞。采用MTT法(噻唑蓝染色法)测定各组的OD值,观察瘦素对成骨细胞增殖能力的影响;采用RT-PCR法测定不同浓度瘦素作用成骨细胞后VEGFmRNA的表达情况。结果1.成骨细胞接种24h后大量细胞贴壁生长,形态呈梭形,三角形和多角形及不规则形等多种形态;碱性磷酸酶染色后,大多数细胞膜及胞浆中可见黑褐色颗粒。当细胞约18-20天左右形成钙结节后,经茜素红染色,可见散在红色颗粒状物质。2.经MTT法检测后表明,瘦素作用24h后,各实验组OD值随瘦素浓度升高而增加。3.经RT-PCR法检测表明,VEGF mRNA可在乳鼠成骨细胞内稳定表达;半定量分析表明,不同瘦素剂量组间VEGF mRNA的表达量呈现一定规律,随着瘦素浓度的升高,VEGFmRNA的表达量逐渐增加。结论瘦素可促进成骨细胞增殖;VEGF mRNA在成骨细胞内稳定表达;瘦素可上调成骨细胞上VEGFmRNA的表达,并存在剂量依赖关系。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
前言  7-8
实验一成骨细胞的分离培养及细胞鉴定  8-15
  材料与方法  8-11
  结果  11-14
  讨论  14-15
实验二不同浓度瘦素对乳鼠成骨细胞增殖的影响  15-19
  材料与方法  15-17
  结果  17-18
  讨论  18-19
实验三不同浓度瘦素对VEGFmRNA 表达的影响  19-25
  材料与方法  19-22
  结果  22-24
  讨论  24-25
结论  25-26
参考文献  26-28
综述  28-34
  参考文献  32-34
个人简介  34-35
致谢  35

不同浓度瘦素对乳鼠成骨细胞增殖及VEGFmRNA表达的影响

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