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不同动物肠道优势需氧菌分离及其对黄豆苷原转化菌株转化能力的影响
作 者: 罗景龙
导 师: 王秀伶
学 校: 河北农业大学
专 业: 微生物与生化药学
关键词: 肠道优势需氧菌 黄豆苷原 雌马酚 微生物转化 混合培养
分类号: Q93
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
黄豆苷原(daidzein)是大豆异黄酮的重要组成成分,摄入机体内的黄豆苷原可被胃肠道微生物菌群代谢为二氢黄豆苷原(dihydrodaidzein,简称DHD)、雌马酚(equol)和去氧甲基安哥拉紫檀素(O-Desmethylangolensin,简称O-Dma)等多种代谢产物。有氧条件下,采用稀释涂布法分别从ICR小鼠、芦花鸡、长白猪和獭兔等4种健康动物肠道中分离优势需氧菌,将分离的优势需氧菌按不同动物来源分别与以前分离的黄豆苷原转化菌株进行厌氧混合培养,通过高效液相色谱检测混合菌对黄豆苷原的转化情况。根据16S rRNA基因序列分析,结合形态学及相关生理生化特征,分离的22株优势需氧菌分属埃希氏菌属(10株)、变形菌属(5株)、肠球菌属(4株)、芽孢杆菌属(2株)和假单胞菌属(1株)五个属。从每种动物肠道分离的优势需氧菌中按不同属各随机挑选一株,分别与以前分离的三种不同功能的黄豆苷原转化菌株进行混合培养。结果发现,除来自兔源的蜡样芽孢杆菌(R1)和铜绿假单胞杆菌(R5)外,其余用于混合培养的肠道优势需氧菌对转化菌株转化能力均无明显影响。菌株R1和R5与转化菌株混合并连续转接2~3次后,转化菌株的转化活性完全丧失;菌株R1和R5分别与ICR小鼠肠道菌群在人工模拟肠道营养液中混合并连续5次转接培养后,大约90%的ICR小鼠肠道菌群完全丧失原有的将黄豆苷原转化为雌马酚的能力。不同健康动物肠道优势需氧菌种类既相似又存在差异,与ICR小鼠、芦花鸡和长白猪相比,獭兔肠道优势需氧菌种类存在多样性;不同动物肠道优势需氧菌对黄豆苷原转化菌株转化能力有不同影响,首次发现从兔肠道分离的蜡样芽孢杆菌R1和铜绿假单胞杆菌R5对转化菌株的转化能力有明显抑制作用。
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全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-9 第一章 引言 9-13 1.1 大豆异黄酮及其生物学功能 9-10 1.1.1 大豆异黄酮结构及性质 9 1.1.2 大豆异黄酮的生物学功能 9-10 1.2 大豆异黄酮微生物转化研究现状 10-11 1.2.1 大豆异黄酮在动物体内的代谢 10 1.2.2 大豆异黄酮代谢产物的生物学功能 10-11 1.2.3 大豆异黄酮转化菌株的分离与筛选 11 1.3 不同动物肠道优势需氧菌及其对大豆异黄酮转化菌株转化活性的影响 11-13 1.3.1 不同动物肠道优势需氧菌及其生理功能 11-12 1.3.2 不同动物肠道优势需氧菌对大豆异黄酮转化菌株转化活性的影响 12-13 第二章 不同动物肠道优势需氧菌的分离及鉴定 13-21 2.1 材料 13-16 2.1.1 实验动物 13 2.1.2 菌株分离培养基 13 2.1.3 生理生化鉴定培养基 13-14 2.1.4 药品与试剂 14-15 2.1.5 主要试验仪器与设备 15-16 2.2 试验方法 16-17 2.2.1 不同动物肠道优势需氧菌的分离筛选 16 2.2.2 菌落和菌体形态观察与生理生化特性测定 16 2.2.3 所分离菌株DNA 的提取 16 2.2.4 所分离菌株的16S rDNA 的PCR 扩增 16-17 2.2.5 所分离菌株的16S rDNA 序列分析及系统发育树的构建 17 2.3 结果与分析 17-20 2.3.1 不同动物肠道优势需氧菌的分离 17 2.3.2 不同动物肠道优势需氧菌生物学特征比较 17-18 2.3.3 不同动物肠道优势需氧菌16S rRNA 基因序列分析 18-19 2.3.4 不同动物肠道优势需氧菌种类比较 19-20 2.4 结论 20-21 第三章 不同动物肠道优势需氧菌对黄豆苷原转化菌株转化能力的影响 21-27 3.1 材料 21-22 3.1.1 供试菌株 21 3.1.2 培养基 21-22 3.1.3 药品与试剂 22 3.1.4 主要试验仪器与设备 22 3.2 试验方法 22-23 3.2.1 优势需氧菌与黄豆苷原转化菌株的混合培养及代谢产物检测 22-23 3.2.2 人工模拟肠道环境下的混菌培养 23 3.3 结果与分析 23-26 3.3.1 优势需氧菌与黄豆苷原转化菌株的在厌氧工作站内两两混合 23-25 3.3.2 优势需氧菌与ICR 小鼠肠道菌群的混合培养 25-26 3.4 结论 26-27 第四章 兔源优势需氧菌R1 和R5 代谢物的抑菌活性研究 27-30 4.1 材料 27-28 4.1.1 供试病原菌 27 4.1.2 培养基 27 4.1.3 药品与试剂 27 4.1.4 主要试验仪器与设备 27-28 4.2 试验方法 28 4.2.1 发酵液中抑菌物质的分离提取 28 4.2.2 发酵液抑菌活性测定 28 4.3 结果与分析 28-29 4.4 结论 29-30 讨论 30-31 参考文献 31-37 作者简历 37-38 致谢 38-39
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中图分类: > 生物科学 > 微生物学
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