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万寿菊属植物染色体核型分析及万寿菊psy基因遗传转化体系影响因素的研究

作　者: 张嫔
导　师: 曾丽
学　校: 上海交通大学
专　业: 园艺学
关键词: 万寿菊 叶黄素 遗传转化体系 psy 染色体 核型分析
分类号: S681.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


本研究以八个万寿菊属（Tagetes L.）品种为材料,进行染色体核型分析,从细胞学水平为万寿菊遗传育种提供科学依据。以万寿菊（Tagetes erecta L.）N-091、N-092、N-093和N-094为材料,根据gus基因瞬时表达情况,筛选易转化基因型及外植体种类,在此基础上对根癌农杆菌介导的万寿菊psy基因遗传转化体系的影响因素进行研究,为实现psy基因过量表达,获得高叶黄素含量的万寿菊转基因品种奠定基础。本研究具体结果如下:（1）对八个万寿菊属品种进行染色体核型分析。结果如下:观赏万寿菊丰收、泰山、奇迹、完美黄、完美橙黄、印卡橙黄和印卡黄的核型公式分别为2n=2x=24=6sm+18m, 2n=2x=24=14sm+10m, 2n=2x=24=24m , 2n=2x=4sm+20m, 2n=2x=24m,2n=2x=2sm+22m,2n=2x=24m;染色体长度组成分别为2n=4L+6M2+10M1+4S,2n=6L+4M2+10M1+4S,2n=4L+8M2+8M1+4S,2n=6L+6M2+6M1+6S,2n=2x=4sm+20m,2n=4L+8M2+8M1+4S,2n=4L+4M2+12M1+2S。核型类型分别为1B, 2B, 1B, 1B, 1B, 1B, 1B。孔雀草金门的核型公式为2n=4x=48=4sm+44m;染色体长度组成为2n=12L+8M2+16M1+12S;核型类型为1B。（2）以万寿菊N-091、N-092、N-093和N-094的叶片及带腋芽茎段为实验材料,各品种gus基因瞬时表达阳性率结果为:N-094（86.6%）>N-093（73.3%）>N-091（43.3%）>N-092（40%）,易转化的基因型为N-094。（3）以N-094的叶片和带腋芽茎段为外植体,再生诱导率结果为带腋芽茎段（93.3%）>叶片（50%）,表明带腋芽茎段可作万寿菊再生体系的外植体。其诱导培养基为:MS + 6-BA 0.1 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+植物凝胶6 g/L。（4）以N-094带腋芽茎段为外植体,研究psy基因遗传转化体系各影响因素,结果为:预培养1 d,农杆菌浓度OD600=0.8,1/2 MS悬浮,共培养时培养基添加AS浓度为100μmol/L,侵染采用80 W、10 min的超声波针刺法处理,黑暗共培养2 d,选择培养基中抗生素Kan浓度为80 mg/L,Cef400 mg/L。利用上述体系,本研究侵染外植体485个,获得4个抗性株系,经过PCR检测,有两株呈阳性,阳性植株获得率为0.41%。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-11
第一章 绪论  11-24
  1.1 万寿菊概述  11-13
    1.1.1 形态及生长习性  11
    1.1.2 功能  11-12
    1.1.3 栽培及育种  12-13
  1.2 植物染色体核型分析研究进展  13-17
    1.2.1 方法与标准  13-16
    1.2.2 万寿菊核型分析现状及存在的问题  16-17
  1.3 万寿菊的遗传转化概况  17-23
    1.3.1 万寿菊的组培现状  17-18
    1.3.2 根癌农杆菌介导的遗传转化方法与机理  18-19
    1.3.3 遗传转过过程中的影响因素  19-20
    1.3.4 万寿菊遗传转化研究现状  20-21
    1.3.5 PSY 基因的研究现状  21-23
  1.4 本研究的目的和意义  23-24
第二章 万寿菊属植物染色体核型分析  24-38
  2.1 材料  24-25
  2.2 方法  25-28
    2.2.1 万寿菊属植物根尖染色体压片技术  25-26
    2.2.2 染色体核型分析标准  26
    2.2.3 Photoshop 核型分析方法  26-28
  2.3 结果与分析  28-35
    2.3.1 万寿菊染色体核型分析结果  28-29
    2.3.2 孔雀草染色体核型分析结果  29-35
  2.4 讨论  35-38
    2.4.1 万寿菊属不同种间染色体核型差异  35
    2.4.2 同种不同品种间染色体核型差异  35-36
    2.4.3 万寿菊属植物遗传进化关系  36-38
第三章 万寿菊psy 基因遗传转化体系影响因素的研究  38-57
  3.1 材料  38-40
    3.1.1 植物材料  38-39
    3.1.2 菌株和载体  39
    3.1.3 实验试剂  39-40
    3.1.4 培养基的制备  40
  3.2 方法  40-44
    3.2.1 菌液制备  40-41
    3.2.2 GUS 检测方法  41
    3.2.3 易转化基因型的筛选  41
    3.2.4 外植体种类及再生培养基配方的筛选  41-42
    3.2.5 遗传转化过程影响因素水平的确立  42-43
    3.2.6 转基因植株的PCR 检测  43-44
  3.3 结果与分析  44-50
    3.3.1 易转化基因型的筛选  44-45
    3.3.2 外植体种类及再生培养基配方的筛选  45-46
    3.3.3 带腋芽茎段遗传转化体系影响因素水平的确定  46-49
    3.3.4 转基因植株的PCR 检测  49
    3.3.5 侵染外植体与对照外植体的生长表型差异  49-50
  3.4 讨论  50-57
参考文献  57-64
致谢  64-65
攻读学位期间发表的学术论文  65-68
附件  68

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺（花卉和观赏树木） > 一、二年生花卉类 > 其他
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