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去细胞心脏支架的制备和鉴定

作　者: 蒋立仲
导　师: 段亚琦
学　校: 华中科技大学
专　业: 生理学
关键词: 去细胞化生物支架主动脉逆行性灌流
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景心血管疾病已成为全球死亡率最高的疾病之一,心力衰竭是各种心血管疾病的终末期。传统治疗方法主要有药物治疗、外科治疗和介人治疗等,都不能达到根治的程度,只能在一定程度上缓解心力衰竭的发生或症状,唯一能够根治心力衰竭的方法是进行心脏移植。但是心脏移植术后的免疫排斥反应及其并发症是导致术后患者死亡的主要原因。此外用于手术的供体短缺是长久以来限制心脏移植的进行和发展的另一重要因素。当今,组织工程学进行了一系列的研究,以获得用于心脏移植手术的人工生物替代品。研究探讨了多种聚合物以及天然生物材料,其中去细胞化材料具有低免疫原性,良好的组织相容性,促进细胞黏附、增殖等优点,是目前最具有研究前景的生物材料。在组织工程技术和再生医学研究中,去细胞生物支架材料如心脏瓣膜、血管、皮肤、神经、骨骼肌、腱膜、韧带、小肠粘膜下组织、膀胱和肝脏,已经进入临床前期动物实验或临床治疗阶段。目的:本文旨在利用去污剂在Langendorff灌流装置上进行主动脉逆行性灌流以制备去细胞心脏支架,并对该生物支架进行初步鉴定,为下一步结合种子细胞进行人工心脏构建提供实验数据。方法:1.成年雄性SD大鼠,通过腹腔注射进行全身肝素化。10%水合氯醛麻醉后正中胸骨切开术打开胸腔,除去胸骨后脂肪体,解剖分离升主动脉及分支血管。结扎其分支血管,从胸腔取出心脏置于冰的肝素PBS中。预先准备的主动脉插管插入升主动脉进行逆行性冠脉灌注。首先用含有10uM腺苷的肝素PBS在77.4mmHg动脉灌注压下灌注15分钟,然后使用1%十二烷基硫酸钠灌流12-20小时至心脏成乳白色囊状物,接着用去离子水灌注15分钟,用1%Triton- X100灌注30分钟,最后用含有抗生素PBS灌注2小时。2.对去细胞心脏支架进行固定,按照常规处理后进行H&E组织学染色,免疫荧光染色等初步鉴定。结果;1. H&E组织学染色结果显示:去细胞心脏支架中没有完整的细胞核,胶原纤维得到较好的保留。2.免疫荧光染色结果显示:去细胞心脏支架中保留了大部分胶原纤维,心肌细胞去除完全。结论;Langendorff主动脉逆行性灌流法可以很好的去除高免疫原性的心肌细胞,大量胶原纤维得到完整保留,去细胞效果较好,是一种较好的获得细胞外基质材料的方法。

全文目录

中英文缩略语对照表  5-6
摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料与设备  12-14
实验方法  14-18
结果  18
结论  18
讨论  18-21
参考文献  21-25
附图  25-27
综述  27-40
  参考文献  36-40
致谢  40

去细胞心脏支架的制备和鉴定

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