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白英皂苷各组分免疫佐剂活性研究

作　者: 何天明
导　师: 吴德峰；孙红祥
学　校: 福建农林大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 白英皂苷佐剂活性 OVA rHBsAg
分类号: S853.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

白英(Solanum Lyratum Thunb)茄科植物的全草,别名白毛藤、毛风藤等。其味苦,微寒,入肝、胆经,具有清热解毒、祛风化痰、利湿退黄、抗癌等功效,作为传统中药治疗癌症已有2000多年的历史。本课题通过传统提取分离方法独步分离到白英总皂苷和其各组分。结合药效学实验对白英中各皂苷组分对模式抗原卵清蛋白(OVA)和重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)疫苗的免疫佐剂活性作用进行了研究,并以此来考察白英皂苷各组分中佐剂作用的强弱,找出其中免疫作用最好的组分,为将来进一步分离研究具有具有较强免疫佐剂作用的白英皂苷单体做好准备。实验共分为三个部分:1白英皂苷各组分的分离与鉴定。白英中药材以80%乙醇回流提取,醇提取物经乙醚脱脂,以水饱和正丁醇萃取,减压浓缩得到白英总皂苷。总皂苷经大孔树脂用四个浓度梯度的乙醇进行洗脱分离,得到四个组分A、B、C和D,经Molish反应等多种方法鉴定都含有皂苷。2白英皂苷各组分对OVA免疫佐剂活性研究。采用ELISA检测白英皂苷各组分对OVA免疫小鼠血清中OVA特异性IgG抗体及抗体亚类IgG1,IgG2a效价的影响。结果表明白英皂苷各组分均能显著提高OVA免疫小鼠血清特异性IgG和IgG1, IgG2a效价(P < 0.05或P < 0.01),其中以C组分的佐剂活性作用最优。说明白英皂苷各组分能同时显著促进OVA免疫小鼠Th1型细胞免疫应答和Th2型体液免疫应答。但实验结果同时表明,白英各皂苷组分的佐剂活性与各组分极性的大小没有相关性,已有的研究已发现皂苷极性的大小主要与所连接的糖链的大小有关,而佐剂活性,主要与所连接的糖基种类有非常重要的关系。3白英皂苷各组分对重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)疫苗的免疫佐剂活性作用研究。采用ELISA检测白英皂苷各组分对rHBsAg免疫小鼠血清中的特异性IgG抗体及其IgG1、IgG2a亚类抗体的效价的影响。结果表明各组分均能显著提高免疫小鼠血清中特异性IgG抗体及其IgG1、IgG2a亚类抗体的效价(P < 0.05或P < 0.01),Alum组也能显著提高免疫小鼠血清中特异性IgG抗体及其IgG1水平,但在IgG2a亚类抗体方面,与单独rHBsAg相比,差异不显著。白英皂苷中的C组分佐剂活性极显著优于Alum( P< 0.01)。表明白英皂苷各组分对rHBsAg免疫小鼠细胞免疫和体液免疫应答均有显著的佐剂作用,且细胞免疫方面的佐剂活性效果显著优于Alum(P < 0.05or P <0.01)。MTT法检测了白英皂苷各组分对rHBsAg受免小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果表明:与单独rHBsAg组Alum组相比,合各组分均能显著促进Con A、LPS和rHBsAg诱导的rHBsAg受免小鼠淋巴细胞增殖反应(P < 0.05or P < 0.01),其中C组分的佐剂活性最显著,明显优于Alum( P < 0.01)。实验结果也表明,对比于Alum佐剂组,白英皂苷各组分对rHBsAg免疫小鼠自然杀伤细胞(NK)和抗原特异性细胞毒型T淋巴细胞(CTL)活性有显著增强作用(P < 0.05or P < 0.01)。特别是其中的C组分可显著促进机体对靶细胞的非特异性和特异性杀伤能力(P < 0.01)。

全文目录

摘要  8-10
Abstract  10-14
第一章综述  14-28
  第一节白英化学成分与生物活性研究进展  14-23
    1 化学成分研究  14-20
    2 白英的药理活性研究进展  20-23
  第二节免疫佐剂的使用与发展  23-28
    1 免疫佐剂的使用  23
    2 佐剂的发展  23-25
    本课题研究背景、研究目的和内容  25-28
      1 本课题研究背景  25-27
      2 研究目的  27
      3 研究内容  27-28
第二章白英皂苷各组分免疫佐剂活性研究  28-53
  实验一白英皂苷各组分的分离与鉴定  28-33
    1 材料和仪器  28
    2 方法与步骤  28-31
      2.1 白英皂苷各组分的提取分离  28-29
      2.2 总皂苷和各组分的鉴定  29
        2.2.1 泡沫反应  29
        2.2.2 Molish 反应  29
        2.2.3 Libermann-Burchard 反应  29
      2.3 总皂苷含量测定  29-30
        2.3.1 标准曲线的绘制  30
        2.3.2 样品的准备  30
      2.4 溶血性实验  30-31
        2.4.1 动物红细胞悬液配制  31
        2.4.2 溶血试验  31
    3 结果与分析  31-32
      3.1 白英总皂苷的得率与各组分的鉴定  31
      3.2 总皂苷与各组分的溶血性研究  31-32
    4 讨论  32-33
  实验二白英皂苷各组分对OVA 受免小鼠佐剂作用的研究  33-40
    1 材料和仪器  33-34
    2 方法与步骤  34
      2.1 动物分组与免疫接种  34
      2.2 OVA 受免小鼠血清中特异性抗体效价的检测  34
      2.3 数据分析  34
    3 结果与分析  34-37
      3.1 OVA 受免小鼠的血清中特异性IgG 抗体效价  34-35
      3.2 OVA 受免小鼠的血清中特异性IgG1 抗体效价  35-36
      3.3 OVA 受免小鼠的血清中特异性IgG2a 抗体效价  36-37
    4 讨论  37-40
  实验三白英皂苷各组分对重组乙肝疫苗的佐剂作用研究  40-53
    1 材料和仪器  40-41
    2 方法与步骤  41-44
      2.1 免疫接种  41
      2.2 对rHBsAg 受免小鼠血清中特异性抗体效价的影响  41
      2.3 对rHBsAg 受免小鼠脾淋巴细胞增殖的影响  41-42
        2.3.1 脾细胞悬液制备  41
        2.3.2 淋巴细胞增殖反应  41-42
      2.4 对rHBsAg 受免小鼠NK 细胞活性的影响  42
        2.4.1 脾细胞悬液的制备（效应细胞）  42
        2.4.2 靶细胞制备  42
        2.4.3 NK 细胞活性测定（乳酸脱氢酶LDH 测定法）  42
      2.5 对rHBsAg 受免小鼠细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）活性的影响.  42-43
      2.6 数据分析  43-44
    3 结果与分析  44-50
      3.1 对rHBsAg 受免小鼠血清中特异性抗体效价的影响  44-47
        3.1.1 rHBsAg 受免小鼠IgG 抗体效价  44-45
        3.1.2 rHBsAg 受免小鼠IgG1 抗体效价  45-46
        3.1.3 rHBsAg 受免小鼠IgG2a 抗体效价  46-47
      3.2 对rHBsAg 受免小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响  47-49
        3.2.1 rHBsAg 抗原特异性刺激脾淋巴细胞增殖反应的检测  47
        3.2.2 LPS 诱导的rHBsAg 受免小鼠脾淋巴细胞增殖反应的检测  47-48
        3.2.3 ConA 诱导的rHBsAg 受免小鼠脾淋巴细胞增殖反应的检测  48-49
      3.3 对rHBsAg 受免小鼠NK 细胞活性的影响  49
      3.4 对rHBsAg 受免小鼠细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）活性的影响  49-50
    4 讨论  50-53
第三章结论及展望  53-54
  通过以上试验研究,得出以下结论  53
  展望后续研究工作  53-54
参考文献  54-60
致谢  60

白英皂苷各组分免疫佐剂活性研究

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