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运用二维电泳筛选卵巢癌细胞差异蛋白

作 者: 鲍引娣
导 师: 马丁
学 校: 华中科技大学
专 业: 妇产科学
关键词: OV2008 C13K 二维电泳 TCTP Stathmin1/Op18 Eif-5A ERP29 HSP27 MACC1 上皮性卵巢癌 免疫组化
分类号: R737.31
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


是不太可能的7,因而需要研究其终产物-蛋白质。蛋白组(proteome)是指一个基因组或一种细胞?组织所表达的所有蛋白质。蛋白组学(proteomics)是指对蛋白质组进行研究的科学,其内容包括在特定时间,特定状态下细胞或组织全部蛋白质及翻译后的修饰8。二维电泳(two-dimensional electrophoresis)是根据蛋白的等电点(PI)和分子量(MW)来分离不同种类的蛋白质。鉴于其高通量,高分辨率,重复性好,且可与质谱联用的优点,本研究基于寻找卵巢癌新的表面标志物和探讨化疗耐药机制,运用二维电泳技术在配对细胞株即顺铂敏感株OV2008和顺铂耐药株C13K寻找差异蛋白,然后通过质谱分析得出相关结果进行功能验证以探寻与卵巢癌顺铂耐药密切相关的基因,以此为契机来找卵巢癌表面标志物和逆转卵巢癌铂类化疗耐药的策略。【目的】在卵巢癌配对细胞株顺铂敏感株OV2008和顺铂耐药株C13K中,运用二维电泳技术在卵巢癌细胞中寻找差异蛋白质点,质谱分析后筛选卵巢癌耐药相关蛋白,以探寻卵巢癌表面标志物和探讨卵巢癌化疗耐药机制。【方法】运用二维电泳技术在顺铂敏感的卵巢癌细胞株OV2008和顺铂耐药的卵巢癌细胞株C13K中寻找差异蛋白质点,并送质谱分析,结果用Realtime-PCR和Western Blot加以验证。【结果】运用二维电泳技术在配对卵巢癌细胞株OV2008和C13K中寻找差异蛋白质点,结果发现二者差异蛋白质点较多,选取16个有明显差异的蛋白质点送质谱分析,结果选取5个有意义点,翻译控制肿瘤蛋白(Tumor protein translationally-controlled, TCTP)、Stathmin1/Oncoprotein 18、内质网蛋白29(endoplastmic reticulum protein 29, ERP29)、真核起始因子5A(Eukaryotic Translation initiation Factor 5A, eIF-5A)、热休克蛋白27(Heat shock protein 27, HSP27),用Realtime-PCR及Western Blot加以验证,结果与质谱分析的结果基本一致,在顺铂耐药卵巢癌细胞株C13K中TCTP,OP18,eIF-5A和HSP27表达升高,而在对顺铂敏感卵巢癌细胞株OV2008中ERP29表达升高。【结论】初步建立了人卵巢癌配对细胞株顺铂敏感株OV2008和顺铂耐药株C13K的蛋白质组学研究技术,为进一步寻找卵巢癌化疗耐药相关蛋白研究奠定基础。【目的】近年的研究表明MACC1(metastasis-associated in colon cancer-1)与结肠癌的发生发展有关,可作为结肠癌诊断的有用指标,而其在卵巢癌中的研究未涉及,本研究旨在探讨MACC1在上皮性卵巢癌中的表达及其临床病理学意义【方法】采用免疫组织化学方法检测各类卵巢组织标本中MACC1的表达情况。【结果】MACC1在上皮性卵巢癌组织中的表达水平显著高于正常、良性及交界性卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05),且在良性卵巢肿瘤中的表达高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05);在交界性卵巢肿瘤中的表达高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05);在交界性卵巢肿瘤中的表达高于良性卵巢肿瘤,差异无统计学意义(P>0.05)。在中低分化卵巢癌中的阳性率高于高分化卵巢癌(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌的阳性率亦高于Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌(P<0.05)。MACC1表达阳性者伴随有较高的肿瘤转移率(P<0.05),而与年龄无关。【结论】MACC1在上皮性卵巢癌中表达升高,可能作为卵巢恶性肿瘤的预后因素,并为其靶向治疗提供参考。

全文目录


第一部分 运用二维电泳筛选卵巢癌细胞差异蛋白  5-35
  研究背景  5-6
  中文摘要  6-8
  英文摘要  8-10
  材料与方法  10-24
  实验结果  24-29
  讨论  29-32
  参考文献  32-35
第二部分 MACC1上皮性卵巢癌中的表达及其临床病理学意义  35-47
  中文摘要  35-36
  英文摘要  36-43
  讨论  43-45
  参考文献  45-47
综述 蛋白组学在卵巢癌中诊断与治疗的作用  47-58
  参考文献  54-58
致谢  58-59

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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