学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

中药葛根有效成分提制分析及抗氧化活性成分筛选以及与DNA相互作用研究

作　者: 陈庆梅
导　师: 王玉枝
学　校: 湖南大学
专　业: 分析化学
关键词: 葛根素微波辅助萃取酸水解 HPLC 抗氧化活性 DPPH·自由基 HO·自由基 DNA 紫外-可见分光光度法荧光光谱法同步荧光光谱
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 288次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

中药葛根是多年生豆科葛属植物的干燥根块,为我国常用的传统药食两用植物。葛根中富含异黄酮类化合物、优质淀粉,还含有人体必需氨基酸和硒、锌、锰、锗等多种微量元素,其中最主要的有效成分是葛根异黄酮。葛根具有扩张冠状动脉和脑血管,降低心肌耗氧量,改善心脑血液循环,增强机体免疫力,降低血糖含量等多种药用功能。目前主要用于高血压、糖尿病及心脑血管疾病的治疗,异黄酮葛根素是治疗心脑血管疾病的代表药物之一。基于葛根在医药、食品和化妆品当中的药用价值,对葛根活性成分进行提制分析及对抗氧化活性成分进行筛选,并对其与生物大分子DNA的作用方式进行研究具有重要意义。本研究主要从以下三个方面开展工作：(1)葛根中葛根素的提制分析以野葛根为研究对象,研究微波酸水解法提取葛根中的葛根素(puerarin),并将所拟提取方法同超声酸水解、微波辅助萃取、冷凝回流提取及室温冷浸4种方法进行对比。通过单因素实验及正交实验对微波酸水解提取条件进行优化,以葛根素得率为指标,考察盐酸浓度、乙醇浓度、萃取温度和萃取时间等因素对实验结果的影响。采用HPLC-UV分析方法检测葛根素的含量。实验采用C18(日本岛津15 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,甲醇：0.4%冰乙酸=40：60(v／v)为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm,进样体积为10μL。实验结果表明,各因素对葛根素提取率影响的主次顺序为：盐酸浓度>萃取温度>乙醇浓度>萃取时间。最佳提取工艺条件为：盐酸浓度0.4 mol/L,乙醇浓度80%,萃取温度60℃,萃取时间3 min。葛根素测定线性回归方程为Y=2.22×107X-456131.5(r=0.9994),加标回收率在96.3%～103.6%之间,RSD为3.2%。所拟方法具有良好的精密度和重现性。用所拟方法进行实际样品分析,结果满意。(2)葛根中抗氧化活性成分的筛选和鉴定从天然产物,尤其是从具有临床应用基础的传统植物药中寻找安全、低毒、高效的天然抗氧化剂具有重要意义。本研究以葛根总异黄酮为原料,通过其对DPPH自由基的清除作用,结合HPLC和MS分析检测技术来筛选并鉴定其内在的抗氧化活性成分。实验结果表明：葛根异黄酮中活性成分葛根素、大豆苷和大豆苷元这三种异黄酮具有自由基清除活性。进一步研究采用不同反应体系结合可见分光光度法测定葛根素、大豆苷和大豆苷元这三个物质清除DPPH自由基和HO自由基的能力以及螯合Fe2+金属离子的能力。结果表明,葛根素、大豆苷和大豆苷元均具有不同程度的自由基清除能力及螯合金属离子的能力,从而表现为抗氧化活性。其抗氧化活性的强弱与其分子结构中酚羟基的数目有关。本研究为葛根提取物特别是葛根素对心脑血管疾病治疗提供了有力的佐证。(3)葛根素与鲑鱼精子DNA相互作用方式的研究药物分子与DNA相互作用的研究对阐述药物的治病机理及药物设计方面具有重要意义。本研究采用紫外-可见分光光度法、荧光光谱法和同步荧光光谱法并借助中性红光谱探针(NR)研究了葛根素与鲑鱼精子DNA的相互作用方式。实验结果表明：药物分子葛根素以插入方式进入DNA的碱基对中,与DNA形成不发荧光的复合物而引起葛根素的荧光静态淬灭。葛根素与DNA相互作用的结合位点数为1.28,结合常数为1.99×105M-1,两者之间具有较高的亲和力。此外,还考察了葛根素荧光强度与其浓度之间的线性范围,溶液pH值对葛根素荧光强度的影响及葛根素与DNA相互作用的适宜反应时间。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-12
第1章绪论  12-27
  1.1 葛根资源及其功能  12-13
    1.1.1 葛根资源概况  12
    1.1.2 葛根主要成分  12
    1.1.3 葛根药用功能  12-13
  1.2 葛根提取技术  13-15
    1.2.1 水煎煮法  13-14
    1.2.2 浸渍法  14
    1.2.3 碱提酸析法  14
    1.2.4 加热回流法  14
    1.2.5 超声波辅助萃取法  14-15
    1.2.6 微波辅助萃取法  15
  1.3 葛根分析检测技术  15-17
    1.3.1 色谱法  15-16
    1.3.2 紫外分光光度法  16-17
    1.3.3 核磁共振谱法及质谱法  17
  1.4 氧化作用与抗氧化剂的保护作用  17-23
    1.4.1 自由基  17-18
    1.4.2 脂质过氧化作用对机体的损伤  18-19
    1.4.3 抗氧化剂的保护作用  19-20
    1.4.4 异黄酮类化合物抗氧化作用机制  20-21
    1.4.5 抗氧化剂的活性强弱的测定方法  21
    1.4.6 抗氧化剂的活性强弱的检测方法  21-22
    1.4.7 天然抗氧化剂的应用现状与前景  22-23
  1.5 药物分子与DNA相互作用  23-25
    1.5.1 研究药物与DNA相互作用背景  23
    1.5.2 药物分子与DNA的作用模式  23-24
    1.5.3 药物分子与DNA相互作用的检测方法  24-25
  1.6 本课题的研究意义及研究内容  25-27
    1.6.1 本课题的研究背景及研究意义  25-26
    1.6.2 本课题研究内容  26-27
第2章微波酸水解提取及HPLC测定葛根中的活性成份葛根素  27-37
  2.1 引言  27
  2.2 实验部分  27-29
    2.2.1 主要仪器与试剂  27-28
    2.2.2 实验方法  28-29
  2.3 结果与讨论  29-35
    2.3.1 葛根素的定性鉴定  29-30
    2.3.2 最佳提取方法的选择  30-33
    2.3.3 方法学考察  33-34
    2.3.4 样品分析  34-35
  2.4 小结  35-37
第3章中药葛根提取物抗氧化活性成分的筛选及鉴定  37-47
  3.1 引言  37-38
  3.2 实验部分  38-40
    3.2.1 仪器与试剂  38
    3.2.2 实验方法  38-40
  3.3 结果与讨论  40-46
    3.3.1 抗氧化活性单体成分的筛选  40-41
    3.3.2 抗氧化单体成分的MS鉴定  41-43
    3.3.3 抗氧化活性的评价  43-46
  3.4 小结  46-47
第4章葛根素与鲑鱼精子DNA的相互作用方式的研究  47-57
  4.1 引言  47
  4.2 实验部分  47-49
    4.2.1 仪器与试剂  47-48
    4.2.2 试验方法  48-49
  4.3 结果与讨论  49-56
    4.3.1 葛根素荧光淬灭机理  49-50
    4.3.2 葛根素与DNA相互作用的结合位点数和结合常数  50-51
    4.3.3 葛根素与DNA相互作用的紫外吸收光谱研究  51
    4.3.4 NR与DNA相互作用的紫外吸收光谱  51-53
    4.3.5 葛根素对NR-DNA的吸收光谱的影响  53
    4.3.6 葛根素对NR-DNA的同步荧光光谱的影响  53-54
    4.3.7 葛根素与DNA相互作用条件的选择  54-56
  4.4 小结  56-57
结论与展望  57-60
  1 结论  57-58
  2 本研究创新之处  58
  3 展望  58-60
参考文献  60-68
附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录  68-69
致谢  69

中药葛根有效成分提制分析及抗氧化活性成分筛选以及与DNA相互作用研究

内容摘要

全文目录

相似论文