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TFPI-2在子痫前期发病机制中的作用

作　者: 周琼洁
导　师: 李笑天
学　校: 复旦大学
专　业: 产科学
关键词: 组织因子途径抑制物-2 子痫前期时间分辨免疫荧光分析法免疫组织化学转染 boyden小室 CCK-8法 Hochest染色 TUNEL法流式细胞周期法人绒毛膜促性腺激素
分类号: R714.245
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的本研究拟通过临床研究分析正常妊娠和子痫前期孕妇孕妇和胎盘中TFPI-2的表达特点,从整体水平研究TFPI-2与子痫前期发病的关系；应用RNAi和转染技术下调/上调滋养细胞中TFPI-2基因表达水平,研究TFPI-2对滋养细胞增殖、分化、凋亡、侵袭等生物学行为的影响,从细胞水平研究TFPI-2在子痫前期发病中的作用。方法本研究检测正常非孕妇女、各孕周正常妊娠孕妇血清、产后母胎血清TFPI-2水平和胎盘表达,与子痫前期比较差异。应用时间分辨免疫荧光分析法和免疫组织化学法进行检测。采用转染技术上调、下调TFPI-2基因在滋养细胞株BeWo细胞表达后,评估细胞功能,包括boyden小室观察运动、侵袭能力的变化,CCK-8法检测增殖能力的变化,Hochest染色、TUNEL法和流式细胞周期法分析对细胞凋亡的影响,以及应用酶联免疫法检测人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)水平评价分化功能,从而在体外实验中确定TFPI-2基因对滋养细胞株BeWo细胞生物学性状的影响。结果正常妊娠TFPI-2血清水平随孕周增加而增加,孕39周达最大值(282.6±17.1ng/ml),产后立即迅速下降至非孕水平(32.3±7.1ng/ml),胎盘中呈现类似变化。子痫前期中TFPI-2血清水平随孕周降低,胎盘表达增加且随病情进展增高。上调TFPI-2基因表达,BeWo细胞株体外迁移和侵袭能力略下降(p<0.05)；下调后其体外迁移和侵袭能力明显增强(p<0.05)。各组BeWo细胞株转染2d,细胞活力明显受抑制；4d-8d,随着时间延长细胞活力增加。各时点上调TFPI-2细胞活力降低；下调后则显著增加(p<0.05)。随着TFPI-2基因表达增加,凋亡指数、TUNEL阳性率随之上升(p<0.05)。TFPI-2基因表达对BeWo细胞株分泌β-hCG能力无明显影响(p>0.05)。结论1.胎盘是孕期TFPI-2重要来源。2. TFPI-2对维持正常妊娠有重要作用。3.滋养细胞中TFPI-2表达抑制细胞侵袭、增殖能力,诱导凋亡,可能是子痫前期的病因之一。创新点1. TFPI-2可能直接或间接影响滋养细胞的侵袭、增生、分化和凋亡等功能,造成子痫前期的发生,本研究首次具体报道其机制。2.本课题通过临床研究发现现象(子痫前期与TFPI-2有关)；结合体外细胞生物学方法研究其机制(TFPI-2对滋养细胞生物学行为的影响),在整体和细胞水平验证TFPI-2基因在子痫前期发病中的作用。

全文目录

摘要  5-9
  中文摘要  5-7
  英文摘要  7-9
正文  9-45
  前言  9-10
  第一部分子痫前期孕妇血清和胎盘中TFPI-2的表达  10-20
    背景  10-11
    材料与方法  11-13
    结果  13-17
    讨论  17-19
    小结  19-20
  第二部分调节TFPI-2表达对滋养细胞生物学行为的影响  20-41
    背景  20-21
    材料与方法  21-27
    结果  27-37
    讨论  37-40
    小结  40-41
  结论  41-42
  参考文献  42-45
发表论文  45-51
文献综述  51-54
附录  54-55
致谢  55-56

TFPI-2在子痫前期发病机制中的作用

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