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肠道病毒71型感染对小鼠IL-6，TNF-α和脑细胞凋亡的影响

作　者: 陈真真
导　师: 陈宗波
学　校: 青岛大学
专　业: 儿科学
关键词: 肠道病毒71型 RT-PCR IL-6 TNF-α 脑细胞凋亡
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的观察balb/c小鼠对肠道病毒71型(EV71)感染的反应,不同组织(肺、脑)的病理变化,外周血清IL-6,TNF-α的水平及脑细胞凋亡情况。方法5日龄balb/c小鼠,建立EV71感染模型,根据不同处理因素将小鼠分为实验组和对照组,实验组：给予100 TCID50 EV71灌胃0.1ml,对照组：给予相同剂量RPMI1640灌胃。接种后每天详细观察动物症状并相应予以评分；分别于接种不同时间(1天、3天、5天、7天)处死小鼠,HE染色观察不同组织(肺、脑)的病理变化；RT-PCR检测EV71对脑组织的侵犯情况；ELISA检测外周血清IL-6,TNF-α的水平；膜连蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双染结合流式细胞术(FCM)测定小鼠脑细胞的凋亡情况。应用方差分析进行统计学处理。结果(1)接种病毒1天后实验组小鼠即可出现少动、弓背、翘尾症状,3天后明显消瘦,其中7只小鼠出现后肢活动不灵,5天后3只小鼠死亡。对照组小鼠均存活且主观观察未见明显症状。(2)实验组小鼠于接种病毒3天时肺组织出现明显病理改变,表现为肺泡壁增厚,大量淋巴细胞浸润,肺间质水肿,脑组织表现为胶质细胞增生明显,对照组未见明显变化。(3)接种病毒第5天和第7天可于实验组脑组织检测到病毒RNA,接种病毒第1天和第3天于实验组未检测到病毒RNA,对照组所有时段病毒RNA全部阴性。(4)实验组血清IL-6,TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05),并于24-72h达高峰,此后逐渐下降,于第7天时基本降至正常。(5)实验组小鼠脑细胞于接种第3天始出现凋亡,于第5天达高峰,第7天时该比率反而降低,但是仍高于对照组,差异有显著性。结论(1)balb/c小鼠模型可以模拟EV71感染中枢神经系统表现：接种EV71后小鼠出现相应症状,脑、肺组织出现病毒感染的表现,脑组织可检测到EV71 RNA；(2)EV71感染过程中,外周血TNF-α,IL-6于感染早期明显升高,72h后逐渐下降,7天左右恢复正常,可引起机体炎症反应；(3)EV71感染过程中,早期即可出现脑细胞凋亡,接种病毒第5天时达高峰,与病毒核酸检出相一致；(4)炎症损伤和细胞凋亡机制共同参与EV71感染中枢损害过程。

全文目录

中文摘要  2-3
Abstract  3-6
引言  6-8
第一章材料和方法  8-15
  1.1 主要实验试剂及仪器  8-9
  1.2 实验材料  9-10
  1.3 实验设计  10
  1.4 实验步骤  10-15
    1.4.1 建立EV71感染小鼠模型  10
    1.4.2 组织切片制备及HE染色  10-11
    1.4.3 脑组织RNA提取  11-12
    1.4.4 病毒RNA逆转录合成cNDA及PRC扩增  12-13
    1.4.5 血清IL-6,TNF-a水平测定  13
    1.4.6 脑细胞凋亡测定  13-14
    1.4.7 统计学分析  14-15
第二章结果  15-20
  2.1 小鼠症状观察结果  15
  2.2 组织HE染色结果  15-16
  2.3 脑组织RT-PCR结果  16-17
  2.4 血清IL-6,TNF-α水平  17-18
  2.5 脑细胞凋亡检测结果  18-20
第三章讨论  20-23
结论  23-24
参考文献  24-27
综述  27-37
  综述参考文献  33-37
致谢  37-38
攻读学位期间的研究成果  38-39

肠道病毒71型感染对小鼠IL-6，TNF-α和脑细胞凋亡的影响

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