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氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肺组织的保护作用

作　者: 张鸣号
导　师: 曹军
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 感染性休克 NF-κB通路 氧化苦参碱 心肌线粒体 钙超载
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的本实验在盲肠节扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠感染性休克(septic shock)模型的基础上,给予氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)注射液进行干预,旨在:1.观察OMT对肺组织NF-κB通路的影响并分析其可能的作用机制;2.从心肌细胞能量代谢、心肌及线粒体(mitochondrion,Mit)超微结构和钙超载等方面,对感染性休克大鼠心功能、心肌Mit结构和功能的改变及OMT对其保护作用进行较深入的研究。揭示OMT对感染性休克大鼠心、肺功能的保护作用及其机制,为临床上感染性休克的防治及OMT药理作用的研究与临床应用提供基础实验依据。方法采用CLP法复制大鼠感染性休克动物模型,随机将56只雄性、SD大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型(CLP)组、CLP + OMT高、中、低剂量组、阳性对照(CLP+地塞米松)组。观察OMT对感染性休克大鼠血气、肺组织W/D比值、肺系数、肺含水量等指标及肺组织病理学改变(大体改变及肺病理组织切片)的影响,并采用免疫组化法检测肺组织NF-κB(p65)及IκB-α的活性,放射免疫分析法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-a(tumour necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)蛋白含量的改变。同时,观察OMT对感染性休克大鼠各项心功能参数的影响。比色法测定各组大鼠血浆乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的活性和心肌组织琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)活性以及心肌钙含量。制备心肌组织光镜标本及心肌电镜标本,观察心肌组织病理学及超微结构的改变。结果与假手术组比较:模型组大鼠肺组织NF-κB(p65)及IκB-α的表达明显升高(均P<0.05),并与TNF-a及IL-6含量的上升相一致(TNF-α及IL-6含量分别增加205%和242%)。同时动脉血PaO2及SaO2值分别下降34%和23%(P<0.01);PaCO2增加30%(P<0.05),HCO3-增加31%(P<0.05);肺组织W/D比值、肺系数及肺含水量分别增加36%、34%和11%(均P<0.05),肺组织充血、水肿、中性粒细胞大量浸润及透明膜形成,提示肺组织结构及肺通气/换气功能严重受损。在给予不同剂量的OMT干预后,OMT能显著抑制肺组织NF-κB(p65)及IκB-α的活性(P<0.05),降低肺组织匀浆中TNF-α及IL-6的含量(TNF-αP<0.05;IL-6 P<0.01),提高动脉血PaO2、SaO2含量(均P<0.05),降低PaCO2、HCO3-含量(均P<0.05);降低肺组织W/D比值、肺系数及肺含水量(均P<0.05);并减轻肺组织充血、水肿和中性粒细胞大量浸润及透明膜形成等炎症反应,并且该作用在OMT-高、中剂量组与阳性对照(CLP+地塞米松组)组的结果相一致。同时,模型组大鼠心肌组织光镜下可见心内膜下广泛的心肌结构紊乱;大范围的炎性细胞浸润,多为单核细胞,间杂有少量淋巴细胞和中性粒细胞,也可见毛细血管扩张、出血;间质水肿及成纤维细胞增殖;不同程度的细胞坏死和组织纤维化。超微结构表现为:线粒体显著肿胀,内膜和外膜的完整性明显受到破坏,嵴模糊紊乱,数量减少,融合破坏,部分嵴消失或空泡化,破裂的膜形成小泡或空泡,线粒体内腔扩大,出现无定型电子致密性颗粒,甚至断裂、溶解或消失,内容物溢出,基质模糊不清,并可见破碎线粒体。同时可见心肌纤维排列紊乱,有溶解和空泡形成;胞核固缩明显,染色质边集;闰盘不连续,有断裂、溶解。同假手术组相比,模型组大鼠HR增加15%(P<0.01)、LVEDP增加47%(P<0.01);MAP降低33%、LVSP减少24%、LVdp/dtmax减少38%、-LVdp/dtmax减少32%(均P<0.01);血浆LDH活性增加35%(P<0.01);心肌组织SDH活性下降28%(P<0.01);钙含量增加34%(P<0.01)。在给予不同剂量的OMT干预后,心肌损伤有不同程度的减轻,表现为心肌结构基本正常,水肿及变性、坏死等改变明显减轻,但仍伴有少量的炎性细胞浸润及渗出等改变。电镜下可见心肌纤维排列正常,胞核损伤有不同程度的减轻等。心肌线粒体损伤程度有不同程度的减轻,多数线粒体结构较完整,嵴致密,排列较整齐,部分嵴模糊,排列尚规则,线粒体肿胀减轻,少数线粒体的损伤尚未完全恢复,以CLP+OMT-低剂量组表现最为明显。同时,OMT+CLP-高剂量组及OMT+CLP-中剂量组HR、LVEDP明显降低;MAP、LVSP、LVdp/dtmax等明显升高;-LVdp/dtmax增加(均P<0.01)。血浆LDH活性降低(P<0.01);心肌组织SDH活性升高(P<0.01);钙含量减少(P<0.01)。OMT+CLP-低剂量组只有MAP、±LVdp/dtmax、血浆LDH活性及心肌组织SDH活性等指标明显改善(P<0.01或P<0.05),而HR、LVEDP、LVSP及心肌组织钙含量等无明显改善(均P>0.05)。OMT+地塞米松组与假手术组比较各指标均无明显差异;与模型组比较上述各指标均有明显改善(均P<0.01);与CLP +OMT-高、中剂量组比较各指标均无明显差异(均P>0.05);与CLP +OMT-低剂量组比较各指标均有明显差异(均P<0.05)。结论1.氧化苦参碱能够抑制NF-κB的活化,减少促炎因子(TNF-α,IL-6)的生成,对感染性休克大鼠肺损伤性病变起到保护作用。该作用可能与氧化苦参碱抑制细菌、病毒、LPS等对NIK的活化有关。2.氧化苦参碱具有保护感染性休克大鼠心肌及其线粒体结构和功能完整性、减轻心功能损害的作用,其机制与氧化苦参碱改善感染性休克过程中心肌细胞能量代谢状况,减少心肌细胞内钙超载有关。3.氧化苦参碱高、中剂量组能够有效地改善感染性休克大鼠心肺功能,该作用与地塞米松对感染性休克大鼠心肺功能的保护作用相一致。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-15
正文  15-78
  前言  15-18
  材料与方法  18-38
    1. 材料  18-19
    2. 试验方法  19-38
      2.1 盲肠结扎穿孔法复制大鼠感染性休克动物模型  19-20
      2.2 大鼠尾动脉压的监测  20-21
      2.3 大鼠血流动力学及各项心功能参数的测定  21-22
      2.4 标本的收集及预处理  22-23
      2.5 血气测定  23
      2.6 考马斯亮兰法测定蛋白含量  23-24
      2.7 肺组织W/D 比值、肺系数及肺含水量等指标的测定  24
      2.8 肺组织的HE 染色  24-26
      2.9 肺组织NF-κB（p65）的表达（免疫组织化学法）  26-27
      2.10 肺组织 IkB-α的表达（免疫组织化学法）  27-28
      2.11 肺组织匀浆中TNF-α蛋白含量的测定  28-30
      2.12 肺组织匀浆中IL-6 蛋白含量的测定  30-31
      2.13 血浆乳酸脱氢酶（LDH）活性的测定  31-32
      2.14 心肌组织琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的测定  32-34
      2.15 心肌组织钙含量的测定  34-35
      2.16 心肌组织的HE 染色  35-36
      2.17 心肌组织电镜标本的制备  36-37
      2.18 统计学处理  37-38
  结果  38-49
    1. 各组大鼠一般情况及大体形态学的变化  38
    2. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠肺组织 W/D 比值、肺系数及肺含水量等指标的影响  38-39
    3. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠肺组织学改变的影响  39-40
    4. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠血气的影响  40
    5. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠肺组织NF-κB（p65）表达的影响  40-41
    6. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠肺组织IkB-α表达的影响  41
    7. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠肺组织NF-κB（p65）活性的影响  41-42
    8. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠肺组织IκB-α活性的影响  42-43
    9 OMT 对感染性休克大鼠肺组织中 TNF-α 及 IL-6 含量的影响  43-44
    10. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织学改变的影响  44
    11. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织超微结构改变的影响  44-45
    12. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠心功能的影响  45-46
    13. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠血浆LDH 活性的影响  46-47
    14. 氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌SDH 活性和钙含量的影响  47-49
  讨论  49-60
  结论  60-61
  附图  61-72
  参考文献  72-78
文献综述  78-91
  1. 综述：NF-κB 与感染性休克  78-86
  2. 综述参考文献  86-91
致谢  91-92
攻读学位期间发表的学术论文  92-93
个人简历  93

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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