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非洲爪蟾睾丸紧密连接蛋白occludin和claudin-11的表达及功能分析

作　者: 陈芝娟
导　师: 杨万喜
学　校: 浙江大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 精子发生 非洲爪蟾(Xenopus laevis) 睾丸 紧密连接 血睾屏障 occludin claudin-11
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 9次
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内容摘要


血睾屏障的建立与精子发生密不可分。血睾屏障是睾丸中用于保护生殖细胞不受自身免疫系统及血液中有害分子伤害的生理性屏障,由相邻支持细胞间连续的紧密连接组成。紧密连接形成了一道天然的屏障,它能阻止蛋白质和其他一些大分子通过,为生殖细胞的分化发育创造了良好的环境。Occludin及claudin-11是哺乳类血睾屏障中主要的紧密连接蛋白。为探索这两种蛋白在两栖类睾丸中的表达,本研究以非洲爪蟾(Xenopus laevis)为研究对象,利用RT-PCR、Western blot及免疫荧光方法确认了occludin及claudin-11在爪蟾睾丸中的表达;并用Real-time PCR对成熟前后爪蟾睾丸中occludin及claudin-11的mRNA表达水平进行定量分析比较。结果表明,成熟前后爪蟾睾丸中occludin和claudin-11有较高水平的表达,但其mRNA表达水平没有明显的差异。实验结果与预期基本相符,表明occludin和claudin-11在爪蟾睾丸中是两种稳定而且高表达的蛋白。这两种蛋白可能类似于其在哺乳类血睾屏障中的功能,为爪蟾精子发生提供一个安全的环境,使精子能正常形成。本研究可能为进一步探索两栖类是否存在血睾屏障结构提供了第一手资料。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-7
第一章 综述 睾丸紧密连接蛋白表达调控及血睾屏障区室化效应  7-19
  1.1 引言  7
  1.2 精子发生及其结构基础  7-8
  1.3 紧密连接蛋白的表达及调控  8-12
    1.3.1 Occludin的表达及其作用  9
    1.3.2 Claudin-11的功能及与其他蛋白相互作用  9-11
    1.3.3 Claudin-11在睾丸中的表达调控  11-12
  1.4 血睾屏障及生精上皮的分室效应  12-13
  1.5 两栖类睾丸中claudin和occludin是否表达?  13-19
第二章 非洲爪蟾睾丸紧密连接蛋白occludin和claudin-11的表达及功能分析  19-47
  2.1 引言  19-22
  2.2 材料与方法  22-34
    2.2.1 实验动物及取样  22
    2.2.2 实验材料与设备  22-24
    2.2.3 实验方法  24-34
      2.2.3.1 爪蟾睾丸总RNA抽提  24-25
      2.2.3.2 RT- PCR  25-28
      2.2.3.3 Real-time PCR  28
      2.2.3.4 PCR产物测序  28-29
      2.2.3.5 蛋白免疫印迹  29-33
      2.2.3.6 免疫荧光  33-34
  2.3 结果与分析  34-40
    2.3.1 Occludin及claudin-11在爪蟾睾丸中表达  34
    2.3.2 RT-PCR分析爪蟾睾丸中occludin及claudin-11的mRNA表达  34-40
      2.3.2.1 爪蟾睾丸的总RNA  34
      2.3.2.2 Occludin及claudin-11的扩增  34-36
      2.3.2.3 Real-Time PCR  36-38
      2.3.2.4 爪蟾睾丸总蛋白考马斯染色以及Western blot结果  38-39
      2.3.2.5 Claudin-11的免疫荧光结果  39-40
  2.4 讨论  40-43
    2.4.1 爪蟾睾丸中occludin和claudin-11的表达  40
    2.4.2 爪蟾睾丸中mRNA水平的occludin和claudin-11表达  40-41
    2.4.3 爪蟾睾丸中蛋白水平的occludin表达  41
    2.4.4 不同发育时期爪蟾睾丸中claudin-11的表达差异  41-43
  2.5 结论  43-47
    2.5.1 爪蟾睾丸中occludin蛋白  43-45
    2.5.2 爪蟾睾丸中claudin-11蛋白  45-47
参考文献  47-52
已经发表的文献  52-53
致谢  53

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 分子遗传学
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