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甲型副伤寒STF口服制剂的制备和检定

作　者: 周建伟
导　师: 罗军敏
学　校: 遵义医学院
专　业: 免疫学
关键词: 甲型副伤寒沙门菌特异性转移因子制备检定
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:初步研制一种用于紧急预防和辅助治疗甲型副伤寒的新型生物制剂,并探索其制备工艺。方法:(1)体内免疫法制备甲型副伤寒特异性转移因子(PA-STF):制备甲型副伤寒沙门菌(SPA)免疫原,采取皮下多点注射免疫山羊,免疫成功后分别取脾脏和淋巴结制备PA-STF。(2)体外免疫法制备PA-STF:采用SPA体外免疫脾细胞技术,探索PHA刺激的合适剂量、免疫原最佳浓度及最佳作用时间、免疫羊脾细胞最适培养时间,按优化条件培养羊脾细胞,制备PA-STF。(3)PA-STF的理化性质检定:采用紫外分光光度计进行多波长扫描,以苔黑酚法和改良Lowry法分别检测PA-STF的核糖及多肽含量,并进行无菌试验、热原质试验和安全试验等。(4) PA-STF的免疫学活性检定:取昆明小鼠,随机分成实验1组、实验2组、对照1组、对照2组和NS组,分别以体内法制备的PA-STF、体外法制备的PA-STF、体内法制备的非特异性转移因子(nTF)、体外法制备的nTF、生理盐水灌胃,采用淋巴细胞增殖试验、白细胞粘附抑制试验(LAIT)、吞噬细胞吞噬功能试验、吞噬细胞杀菌功能试验和免疫保护性试验等检定PA-STF的免疫学活性。免疫保护性试验中,SPA攻击后第4天仍然存活的小鼠,取5只观察攻击后2周时的一般情况,剩余小鼠在攻击后第7天处死,剪取3cm的回肠用4%甲醛固定后,HE染色,镜检,观察肠粘膜的病理学改变。结果:(1)以淋巴结制备的PA-STF的多肽浓度为1.83±0.17mg/ml,核糖浓度为0.572±0.024mg/ml,以脾脏制备的PA-STF的多肽浓度为1.59±0.22 mg/ml,核糖浓度为0.493±0.015mg/ml,两者相比,多肽之间及核糖之间浓度没有显著差异(P＞0.05)。(2) 100μg/ml的PHA与脾细胞培养6h后,加入0.2ng/ml的SPA免疫原,继续培养至96h条件下制备的PA-STF的多肽和核糖的含量,明显高于其他剂量、时间等条件下制备的PA-STF(P＜0.05)。(3)两种方法制备的PA-STF的氨基酸、多肽、核糖的含量无显著性差异(P＞0.05),无菌试验均为阴性,热原质试验和安全试验均合格。(4)两种方法制备的PA-STF在多肽浓度为0.60mg/ml时,对淋巴细胞的刺激指数(SI)明显高于其它浓度时的SI(P＜0.05);两实验组的LAIR均高于两对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);两实验组之间比较,LAIR无显著性差异(P＞0.05);吞噬细胞的吞噬功能和杀菌功能试验中,实验组与对照组之间以及两实验组之间比较,吞噬率和杀菌率均无显著性差异(P＞0.05),各组吞噬率与杀菌率的相关系数均大于0.8;免疫保护性试验中,两实验组分别与两对照组比较,实验组小鼠存活率均明显高于对照组(P＜0.05),两实验组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。实验组存活小鼠2周时一般情况明显好于其它组,且病理学结果显示小鼠回肠粘膜的炎性程度较其它组轻。结论:(1)体内免疫法成功制备PA-STF,脾脏和淋巴结均可作为制备原料;体外免疫法成功制备PA-STF,以100μg/ml的PHA与脾细胞共同培养6h,然后加入浓度为0.2ng/ml的PA免疫原,第96h终止培养为最佳制备条件。(2)两种方法制备的PA-STF口服制剂的理化性质均符合《中国药典》(2005版)的要求标准。(3)两种方法制备的PA-STF口服制剂均可以增强小鼠的非特异性免疫应答,能够转移针对SPA的特异性免疫效应。

全文目录

英汉缩略词对照表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
材料与方法  13-24
  1 实验材料  13
  2 主要实验试剂  13-15
  3 主要实验仪器  15-16
  4 实验方法  16-24
结果  24-38
讨论  38-43
结论  43-44
参考文献  44-46
特异性转移因子的研究现状及临床应用进展(综述)  46-63
  参考文献  57-63
致谢  63-64
附图  64-65

甲型副伤寒STF口服制剂的制备和检定

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