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大蒜ACEI活性肽制备技术的研究

作　者: 徐霞
导　师: 马海乐
学　校: 江苏大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 大蒜残渣 ACEI活性肽胶束电动毛细管电泳法抑制率超滤
分类号: R544.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 20次
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内容摘要

高血压是最常见的心血管疾病之一,它日益困扰着高血压患者的身心健康,因此对降血压药物的研究也越来越多。血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）具有降血压的作用,本文以大蒜残渣为原料,通过蛋白酶酶解制备出天然的ACEI活性肽,为了提高其活性,进行了超滤纯化。为了满足体外检测功能因子ACEI肽对ACE抑制作用的需要,本文进行了从新鲜猪肺中提取血管紧张素转化酶（ACE）的研究。采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）和胶束电动毛细管电泳色谱（MECC）分别对猪肺提取物进行活性检测,测得其比活力为3.7U/10mL。建立了胶束电动毛细管电泳检测ACEI活性的方法,其检测条件为:分离电压28kV:采取压力进样,进样压力0.5psi:上样时间5S;柱温25℃:电极缓冲液:50mmol/L（含1%SDS）硼酸盐缓冲液,pH8.3:检测波长228nm。本文以水解液的抑制率为试验控制指标,从9种商业蛋白酶中筛选出一种最佳蛋白酶,并得出其最优作用条件为:反应温度50℃、加酶量4%、底物浓度8%、pH8。在该作用条件下,其水解液对ACE的抑制率为85.98%。选用Millipore公司的超滤设备对水解上清液进行超滤,选取截留分子量为10k的超滤膜。以样品温度和操作压力对10k超滤膜通量的影响为根据,得出10k超滤膜的最优操作条件为:样品温度40～50℃、操作压力0.09MPa左右。超滤后的ACEI活性肽的IC₅₀值为2.15 mg/mL。大蒜残渣ACEI活性肽具有很好的热稳定性,但在酸性条件下不稳定,需在pH值为8.3的条件下,冷藏保存。此外该ACEI活性肽能抵抗肠胃蛋白酶的作用,说明其经口服后很可能仍具有降血压作用。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-10
第一章绪论  10-25
  1.1 高血压概述  10-12
    1.1.1 高血压的定义  10
    1.1.2 高血压的分类  10-11
    1.1.3 高血压的发病机理  11
    1.1.4 高血压的治疗  11-12
  1.2 血管紧张素转化酶与高血压  12-13
    1.2.1 血管紧张素转化酶的概述  12
    1.2.2 血管紧张素转化酶在血压调节中的作用  12-13
  1.3 生物活性肽的研究现状  13-15
    1.3.1 肽的吸收机制  14
    1.3.2 生物活性肽的来源及其种类  14-15
  1.4 ACEI活性肽  15-20
    1.4.1 ACEI活性肽的研究现状  15-18
    1.4.2 ACEI活性肽的作用机制  18
    1.4.3 ACEI活性肽的生产方法  18-19
    1.4.4 ACEI活性肽的分离与提纯  19
    1.4.5 ACEI活性肽的特点  19
    1.4.6 ACEI活性肽的研究开发前景  19-20
  1.5 大蒜的开发利用现状  20-21
    1.5.1 大蒜  20-21
    1.5.2 蒜渣  21
  1.6 立题依据及其意义  21-23
    1.6.1 立题依据  21-22
    1.6.2 研究意义  22
    1.6.3 研究内容  22-23
  本章参考文献  23-25
第二章血管紧张素转化酶的制备及其活性检测  25-36
  2.1 引言  25-26
  2.2 血管紧张素转化酶(ACE)的制备  26-27
    2.2.1 材料与仪器  26
    2.2.2 ACE的提取试验  26-27
  2.3 ACE体外活性检测方法的建立  27-29
    2.3.1 检测原理  27
    2.3.2 材料与仪器  27-28
    2.3.3 检测方法  28
    2.3.4 ACE的比活性计算  28-29
  2.4 结果与讨论  29-34
    2.4.1 马尿酸和三肽HHL的特征吸收波长  29
    2.4.2 MECC条件的确立  29-30
    2.4.3 马尿酸浓度与峰面积的关系  30-31
    2.4.4 MECC检测猪肺提取物中ACE的活性  31-32
    2.4.5 RP-HPLC检测猪肺提取物中ACE的活性  32-33
    2.4.6 两种检测方法的比较  33
    2.4.7 ACE检测方法的可行性评价  33-34
  2.5 本章小结  34-35
  本章参考文献  35-36
第三章酶法制备大蒜ACEI活性肽的试验研究  36-47
  3.1 前言  36
  3.2 试验材料与仪器  36-37
    3.2.1 材料  36-37
    3.2.2 仪器  37
  3.3 试验方法  37-39
    3.3.1 反应条件  37-38
    3.3.2 ACEI活性的测定  38-39
    3.3.3 蛋白质含量的测定  39
    3.3.4 水解度的测定  39
  3.4 结果与讨论  39-45
    3.4.1 大蒜残渣中蛋白成分的分析  39-40
    3.4.2 单一酶水解物对ACE的抑制效果  40
    3.4.3 复合酶水解物对ACE的抑制效果  40-41
    3.4.4 酶1作用条件的优化及水解参数的建立  41-45
  3.5 本章小结  45-46
  本章参考文献  46-47
第四章大蒜ACEI活性肽的超滤分离  47-55
  4.1 引言  47-48
  4.2 材料与方法  48-50
    4.2.1 试验材料  48
    4.2.2 试验仪器  48
    4.2.3 试验方法  48-50
  4.3 试验结果与讨论  50-53
    4.3.1 膜的选择  50-51
    4.3.2 超滤条件的优化  51-53
    4.3.3 ACEI活性肽的IC_(50)的测定  53
  4.4 本章小结  53-54
  本章参考文献  54-55
第五章大蒜ACEI活性肽功能特性的研究  55-61
  5.1 引言  55
  5.2 材料与方法  55-56
    5.2.1 试验材料  55
    5.2.2 试验仪器  55
    5.2.3 试验方法  55-56
  5.3 结果与讨论  56-59
    5.3.1 加热温度对大蒜残渣ACEI活性肽活性的影响  56-57
    5.3.2 pH对超滤液活性和影响  57-58
    5.3.3 大蒜残渣ACEI活性肽对肠胃蛋白酶耐性的研究  58-59
  5.4 本章小结  59-60
  本章参考文献  60-61
第六章全文工作总结及展望  61-63
  6.1 全文主要结论  61-62
  6.2 存在的问题  62-63
致谢  63-64
在读期间发表的论文  64

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