学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

柑橘无选择标记转化体系的建立及抗溃疡病转基因甜橙种质的获得

作　者: 杨莉
导　师: 邓子牛
学　校: 湖南农业大学
专　业: 果树学
关键词: 无标记载体溃疡病 pthA-NLS ScFv 甜橙
分类号: S666
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 19次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

转基因育种是常规育种的重要辅助手段,但人们担心标记基因的食品安全问题,因此,建立柑橘无选择标记的转化体系,对提高转基因作物的安全性意义重大。柑橘溃疡病是一种世界性的检疫性病害,对产业危害极大,因缺乏抗病资源和有效防控方法,该病仍无法根除。通过转基因育种,抑制病原菌致病因子的功能,获得抗病种质,是一种创新,为彻底控制溃疡病打下基础。本研究的结果如下：1.通过将pX6-gfp中的启动子G10-90替换成CaMV35S,构建了p35S-gfp载体,并通过农杆菌介导法转化实生态甜橙,诱导了gfp的表达,证实此载体能在柑橘中成功发生重组,获得无标记的转基因植株。同时,建立了一套完善的甜橙无标记转基因体系；2.通过农杆菌介导法对冰糖橙导入pthA-NLS基因,经PCR检测,获得了6株转基因株系。利用RT-PCR分析外源基因在转基因植株中的表达,初步表明外源基因pthA-NLS已成功转入到冰糖甜橙基因组中,并能正常表达。3.将ScFv基因克隆到植物表达载体PBI121的Xba I和Sma I中,利用农杆菌介导法转化甜橙实生苗节间茎段,经PCR检测,获得了12株转ScFv基因甜橙,转基因甜橙温室生长。利用RT-PCR分析外源基因ScFv在转基因植株中的表达,初步表明外源基因ScFv已成功转入到大红甜橙基因组中,并能正常表达。采用离体接种对部分转ScFv基因植株进行抗性筛选,结果表明,转基因植株对溃疡病表现出一定的抗性,株系之间抗性存在着差异,其中D9可能是很有希望的抗性材料。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章前言  8-18
  1 问题的提出  8-9
  2 剔除标记基因的研究进展  9-13
    2.1 标记基因的分离剔除法  9
    2.2 标记基因的重组剔除法  9-12
    2.3 重组剔除法的进一步深化  12-13
  3 柑橘溃疡病研究现状  13-17
    3.1 柑橘溃疡病发生历史及病害分布  13-14
    3.2 溃疡病抗性研究  14-15
    3.3 溃疡病防治研究进展  15-17
  4 开展本研究的目的与意义  17-18
第二章无标记载体的构建  18-27
  1 材料与方法  18-23
    1.1 植物遗传转化载体的构建  18-21
    1.2 p35S-gfp转化农杆菌  21-22
    1.3 无标记载体对甜橙的遗传转化  22-23
  2 结果与分析  23-26
    2.1 无标记载体的构建  23-25
    2.2 无标记载体对甜橙的遗传转化  25-26
  3 讨论  26-27
第三章 pthA-NLS转化冰糖橙获得抗病新种质研究  27-33
  1 材料与方法  27-30
    1.1 材料  27
    1.2 pthA-NLS对甜橙的遗传转化  27-28
    1.3 转pthA-NLS基因冰糖橙的PCR鉴定  28-29
    1.4 转pthA-NLS基因冰糖橙外源基因RT-PCR表达分析  29-30
  2 结果与分析  30-33
    2.1 pthA-NLS对冰糖橙的遗传转化结果  30-31
    2.2 转pthA-NLS基因冰糖橙外源基因pthA-NLS表达分析  31-33
第四章单链抗体基因ScFv对甜橙的遗传转化  33-40
  1 材料与方法  33-35
    1.1 材料  33-34
    1.2 方法  34-35
  2 结果与分析  35-38
    2.1 ScFv基因植物表达载体构建  35-36
    2.2 ScFv对甜橙的遗传转化结果  36
    2.3 转ScFv基因甜橙ScFv基因表达分析  36-37
    2.4 转ScFv基因甜橙离体接种抗性试验  37-38
  3 讨论  38-40
全文总结与展望  40-41
参考文献  41-46
缩略词表(Abbreviation)  46-47
致谢  47-48
个人简历  48

柑橘无选择标记转化体系的建立及抗溃疡病转基因甜橙种质的获得

内容摘要

全文目录

相似论文