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利用SRAP标记对湖南柚资源遗传多样性的分析

作　者: 杨迎花
导　师: 邓子牛
学　校: 湖南农业大学
专　业: 果树学
关键词: 柚 遗传多态性 SRAP标记
分类号: S666.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 43次
引　用: 2次
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内容摘要


中国是柚类[Citrus grandis(L.)Osbeck]的主要起源中心和遗传变异中心,种质资源极其丰富。由于其单胚性,在长期进化过程和复杂生态条件下,极易出现遗传变异,形成丰富的遗传多样性。湖南是我国柚类种质遗传多样性的主要分布区,具有丰富的柚类种质资源与地方品种资源。本研究在广泛调查搜集湖南柚类种质资源的基础上,利用SRAP对湖南部分柚类种质资源的遗传差异进行了分析研究,对湖南省柚类资源的遗传多样性及柚类资源间的亲缘关系进行了初步探讨,为湖南特色柚类资源的开发利用及新品种选育提供理论依据。主要试验结果如下:1.构建了适合柚类基因组的SRAP-PCR反应体系。25μl的反应体系包括50ng的总DNA,3μl 10×Buffer,1.6mmol/L MgCl2,0.12mmol/LdNTPs,1UTaqDNA聚合酶,0.2μmol/L的双向引物;最适的PCR扩增程序:94℃预变性5 min,94℃1min,35℃1min,72℃2min,5个循环;94℃1min,55℃1min,72℃2min,35个循环;最后72℃延伸10min。2.从110对SRAP引物对中筛选出了35对多态性较好的引物组合。并利用12对引物组合对32份柚类种质资源及近缘种的遗传多样性进行了分析。每对引物组合产生10～23条比较清晰的扩增带,12对引物组合共产生172条扩增带,平均每对引物组合产生14.4条。12对引物组合共产生多态性带150条,每对引物组合产生8～18条,平均12.5条。每对引物组合产生的多态性带的比例为76.9%～94.7%,平均为87.2%。获得了2个柚类种质资源共3条特征带。3.对32份柚类种质及近缘种的SRAP标记数据进行了统计分析,基于基因型间遗传相似系数的UPGMA聚类结果表明:相似系数0.68为临界值时,可将32份试材分为4个组群,即沙田柚系列,文旦柚系列,甜橙类及野生资源。其中中秋蜜柚、慈利金香柚母株、脆香甜柚等与琯溪蜜柚聚在一组,表明这几个地方品种亲缘关系较近且带有文旦柚血统;安江香柚、辰州香柚、菊花心柚、江永香柚等与沙田柚聚在一组,表明这几个地方品种含有沙田柚血缘。4.对部分收集到的天然柚类杂种的亲缘关系进行了分析,基于基因型间遗传相似系数的UPGMA聚类结果表明,相似系数0.73为临界值时,可将24份地方柚类及天然柚杂种分为5个组群:无名柚、甜柚2号、菠萝香油株系2、水柚子、金瓜等自然杂种与桑植酸橙聚在一组;甜柚一号及其他柚地方品种聚为一组,之后再与第一组聚为一个大组;大庸一号与甜橙聚为一组;慈利金香柚和空心塔柚一组;酸抛子单独一组。综合聚类分析结果与形态学性状的观测结果初步推断:无名柚、甜柚2号、菠萝香油株系2、水柚子、金瓜等自然杂种可能是以橙类为母本、柚类作父本自然杂交而成。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
第一章 前言  10-23
  1 课题的提出  10-22
    1.1 柚的起源中心与生态分布研究进展  11-12
    1.2 柚类起源演化及其系统学分类地位  12-13
    1.3 分子标记技术在果树种质资源研究上的应用  13-17
    1.4 柚类分子标记研究现状  17-22
  2 研究目的的意义  22-23
第二章 柚类SRAP反应体系的建立优化和引物的筛选  23-31
  1 材料与方法  23-26
    1.1 试验材料  23
    1.2 主要仪器与试剂  23-24
    1.3 方法  24-26
    1.4 数据统计分析  26
  2 结果与分析  26-29
    2.1 DNA电泳检测结果  26
    2.2 Mg~(2+)浓度对SRAP反应的影响  26-27
    2.3 dNTPs浓度对SRAP扩增的影响  27
    2.4 Taq DNA聚合酶的用量对SRAP扩增的影响  27-28
    2.5 引物浓度对SRAP反应的影响  28
    2.6 模板DNA用量对SRAP反应的影响  28
    2.7 4份柚资源的SRAP分析  28-29
  3 小结与讨论  29-31
第三章 湖南部分柚类资源的SRAP分析  31-46
  1 材料与方法  31-34
    1.1 供试材料  31-33
    1.2 DNA提取与检测  33
    1.3 SRAP分析  33-34
    1.4 数据统计分析  34
    1.5 形态学性状调查  34
  2 结果与分析  34-44
    2.1 32份柚及近缘种的SRAP分析  34-39
    2.2 天然杂种柚为主的24份资源SRAP分析  39-42
    2.3 部分柚资源的花器官形态性状观测  42-44
  3 小结与讨论  44-46
全文总结和创新之处  46-48
  1 全文总结  46
    1.1 柚SRAP标记体系的建立和优化  46
    1.2 SRAP标记对湖南柚资源多态性分析  46
  2 创新之处  46
  3 展望  46-48
缩略词表  48-49
参考文献  49-55
附图  55-63
致谢  63-64
作者简历  64

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 柑桔类 > 柚（文旦）
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