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NO外源供体SNP对烟草悬浮培养细胞耐热性的效应及与CaM和H_2O_2的关系

作　者: 谢琦
导　师: 龚明
学　校: 云南师范大学
专　业: 环境科学
关键词: 烟草悬浮培养细胞一氧化氮硝普钠钙调素高温胁迫过氧化氢抗氧化酶
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本文以我们实验室建立的表达细胞CaM的转基因烟草H1-2C和未经转化的对照HO2020烟草作为实验材料,研究了NO外源供体SNP对烟草悬浮培养细胞耐热性的效应及与CaM和H₂O₂之间的关系。本研究主要分为三个部分:第一部分利用改进的磷酸二酯酶法测定烟草悬浮培养细胞内CaM的活性,从中筛选能良好表达细胞CaM的转基因烟草H1-2C和未经转化的对照HO2020烟草悬浮细胞,确定实验材料。然后通过研究不同高温胁迫条件下,烟草悬浮培养细胞的TTC还原率和细胞再生能力,确定本实验中适宜的高温胁迫温度和时间。在此基础上,研究NO外源供体SNP对高温胁迫下烟草悬浮培养细胞耐热性的影响。结果表明NO外源供体SNP可以有效缓解高温胁迫下烟草悬浮培养细胞活力的下降和再生能力的损伤,这种效应取决于SNP的处理浓度和处理时间。第二部分在前一部分的基础上,研究了高温胁迫下NO和五种抗氧化酶（SOD、CAT、APX、GPX、GR）之间的相互关系。结果表明,在正常培养条件下,SNP预处理可以提高烟草悬浮培养细胞的抗氧化酶活性;在高温胁迫下,经SNP预处理的烟草悬浮细胞的五种抗氧化酶活性均要高于未经SNP处理的细胞,SNP有助于提高细胞的抗氧化能力。此外,无论是否加入SNP,表达细胞CaM的转基因烟草H1-2C的五种抗氧化酶的活性均比对照HO2020的酶活要高,表明NO和CaM可能通过调控抗氧化酶系统来提高烟草悬浮培养细胞的抗氧化能力。在第三部分中研究了烟草悬浮培养细胞中NO与H₂O₂之间的关系。实验表明,正常培养条件下,外源供体SNP可以引发烟草悬浮培养细胞内H₂O₂的显著上升。在高温胁迫下,NO可能通过引发H₂O₂信号的产生,促进细胞抗氧化酶系统的基因表达与酶活性的上升,最终增强植物细胞的耐热性。以上研究结果表明,NO外源供体SNP预处理可能通过释放NO来诱发烟草悬浮培养细胞耐热性的形成。

全文目录

缩写表  6-8
摘要  8-9
英文摘要  9-11
Ⅰ 引言  11-22
  一、NO的生理生化特性  11
  二、NO在植物体内的合成途径  11-14
  三、NO在植物适应非生物胁迫中的作用  14-17
  四、NO信号系统与其他信号系统之间的关系  17-22
Ⅱ 材料和方法  22-27
  一、植物材料  22
    1、烟草愈伤组织的培养  22
    2、烟草悬浮细胞的培养  22
  二、处理方法  22
    1、高温胁迫处理  22
    2、SNP处理  22
  三、测定方法  22-26
    1、CaM的提取  22-23
    2、CaM的测定  23
    3、无机磷的测定  23
    4、蛋白质的测定  23
    5、细胞TTC还原率的测定  23-24
    6、细胞再生能力的测定  24
    7、细胞H_2O_2的测定  24
    8、抗氧化酶的提取和活性测定  24-26
  四、试剂与仪器  26
  五、试验处理和数据分析  26-27
Ⅲ 实验结果  27-43
  一、NO外源供体SNP对烟草悬浮培养细胞耐热性的影响  27-36
    1、表达细胞CaM的烟草悬浮培养细胞H1-2C和对照HO2020的CaM活性比较  27-28
    2、烟草悬浮培养细胞相关高温胁迫参数的确定  28-31
    3、NO外源供体SNP对烟草悬浮培养细胞耐热性的影响  31-36
  二、SNP预处理对烟草悬浮培养细胞在高温胁迫下抗氧化酶活性的影响  36-40
  三、SNP预处理过程中烟草悬浮培养细胞H_2O_2含量的变化  40-43
Ⅳ 讨论  43-46
  一、NO外源供体SNP对烟草悬浮培养细胞耐热性的影响  43
  二、H_2O_2与抗氧化酶系统对SNP诱导的烟草悬浮培养细胞耐热性可能的作用  43-46
结束语  46-47
参考文献  47-57
致谢  57

NO外源供体SNP对烟草悬浮培养细胞耐热性的效应及与CaM和H_2O_2的关系

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