学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
失眠大鼠脑干GAT-1表达的变化
作 者: 邹艳群
导 师: 杨晓苏
学 校: 中南大学
专 业: 神经病学
关键词: 失眠 PCPA法 GAT-1 脑干 苯二氮卓类
分类号: R740
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 118次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
研究背景失眠(insomnia)是最常见的睡眠障碍(sleep disorders,SD),是多种躯体、精神和行为疾病所具有的常见临床表现,长期失眠会给人的正常生活和工作带来严重的不利影响,甚至会造成严重的意外事故。但其发生的确切机制目前仍不明了。觉醒与睡眠周期的调节主要与脑干的网状结构有关,其中有睡眠诱导功能的上行网状抑制系统(ascending reticular inhibitory system, ARIS)和上行网状激动系统(ascending reticular activating system, ARAS)的动态平衡决定着睡眠-觉醒周期的变化。γ-氨基丁酸(gama-aminobutyric acid,GABA)是哺乳动物中枢神经系统中最主要的抑制性神经递质。GABA与GABAA受体的结合使氯离子(chloride ion,Cl-)通道开放的频率增加,大量Cl-流入细胞膜内,引起突触膜超极化,产生抑制性突触后电位(inhibitory postsynaptic potential, IPSP)而发挥神经抑制功能。GABA转运体(gama-aminobutyric acid transporter, GAT)是一种主要位于神经元及胶质膜上的糖蛋白,属于Na+/Cl-转运蛋白家族,其亚型有GAT-1、GAT-2、GAT-3、GAT-4/BGT1和TAUT。GAT在脑组织内分布广泛,能摄取突触间隙及细胞外液的GABA,终止GABA的抑制作用,与生理病理过程关系密切。GAT表达的异常会导致GABA能神经信号传递的变化,进而导致临床上多种神经系统疾病。在神经系统发育、癫痫、精神分裂等诸多生理病理条件下,广泛存在GAT的变化。提示GAT通过影响GABA能神经元,在神经兴奋/抑制的平衡中扮演着重要的角色,而失眠正是一种神经兴奋/抑制功能失衡导致的临床疾病。地西泮(安定)是治疗失眠的经典药物,属苯二氮卓受体激动剂,通过促进GABA与GABAA受体的结合而发挥神经抑制功能。在失眠及其治疗的过程中,GAT-1会发生怎样的同步变化,目前国内外尚未见相关报道。目的本研究拟采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(ρ-chlorophenylalanine, PCPA)制作大鼠失眠模型,并同步设立生理盐水对照组和地西泮干预组,检测大鼠脑干组织中GAT-1mRNA和GAT-1蛋白的表达变化,初步探讨其与失眠的关系,以寻找临床治疗失眠的新靶点。方法1.动物分组及处理:采用清洁级健康成年雄性Sprague Dawley大鼠为实验对象,共36只,体重180~220g。随机分为模型组、对照组和干预组三组,每组12只动物。①模型组:每日上午8:30~9:00腹腔注射PCPA300mg/kg制作实验性失眠大鼠模型,连续2天。其中PCPA用略碱性生理盐水(pH:7~8)溶解,按1ml/100g配制成混悬液。第三天以蒸馏水按1ml/100g灌胃,连续5天;②对照组:每日上午8:30~9:00以生理盐水按1ml/100g进行腹腔注射,连续2天,第三天以蒸馏水按1ml/100g灌胃,连续5天;③干预组:同模型组腹腔注射PCPA建立失眠模型之后,第三天用地西泮水溶液灌胃,0.92mg/kg,每日上午8:30~9:00一次,连续5天。其中地西泮片用蒸馏水溶解,按1ml/100g配制成水溶液。2.实验动物行为学观察及体重测量:每天定时观察大鼠行为学表现,每3小时录制大鼠活动视频半小时,纵横双向比较大鼠行为学的改变。分别于入组时、第一次腹腔注射PCPA前、第一次灌胃前及处死大鼠取材前当天上午8:00~8:20测量所有大鼠体重并记录。3.将各组受试动物于开始灌胃治疗后第6天快速断头处死,取大鼠脑干组织,超低温保存。4. RT-PCR法和WB法检测大鼠脑干GAT-1的表达。结果1.大鼠行为学表现:对照组大鼠无明显变化。模型组和干预组大鼠于第一次腹腔注射PCPA混悬液28~30h后,出现昼伏夜出的节律消失等失眠表现,模型成功率94.4%。干预组大鼠地西泮灌胃后失眠症状较模型组均逐渐恢复。2.体重变化:入组时、第一次腹腔注射PCPA前三组大鼠体重相当;第一次灌胃前模型组和干预组体重相当,但较对照组均减轻(q=5.403,p<0.01;q=5.508,p<0.01);处死大鼠取材前模型组与干预组较对照组均减轻(q=12.214,p<0.01;q=8.045,p<0.01),干预组较模型组增加(q=4.166,p<0.05)。3.与对照组相比,模型组和干预组GAT-1mRNA的表达均降低(q=26.522,p<0.01;q=44.468,p<0.01),干预组较模型组表达更低(q=17.924,p<0.01)。4.与对照组相比,模型组和干预组GAT-1蛋白的表达均降低(q=11.174,p<0.01;q=16.571,p<0.01),干预组较模型组表达更低(q=5.397,p<0.01)。结论1.脑干GAT-1表达下调可能与失眠后机体的保护性机制有关。2.地西泮下调GAT-1可能是其发挥催眠作用的机制之一。
|
全文目录
中文摘要 4-7 ABSTRACT 7-12 缩略词表 12-13 第一章 前言 13-15 第二章 实验材料 15-17 2.1 主要试剂 15 2.2 主要仪器与设备 15-17 第三章 实验方法 17-24 3.1 研究对象 17 3.2 实验动物分组 17 3.3 PCPA实验性失眠大鼠模型制作的评估 17-18 3.4 组织取材 18 3.5 RT-PCR检测组织内GAT-1mRNA的表达 18-21 3.6 Western-blot检测GAT-1蛋白表达 21-23 3.7 统计学分析 23-24 第四章 结果 24-29 4.1 大鼠行为学变化 24 4.2 大鼠体重的变化 24-25 4.3 总RNA样品质量检测 25-26 4.4 各组GAT-1 mRNA的表达及比较 26-27 4.5 各组GAT-1蛋白的表达及比较 27-29 第五章 讨论 29-34 第六章 结论 34-35 参考文献 35-40 综述 40-58 参考文献 50-58 致谢 58
|
相似论文
- 王琦教授辨体—辨病—辨证相结合学术思想与临床经验总结及治疗慢性失眠的临床研究,R249.2
- 新疆博州地区成人睡眠障碍与睡眠习惯调查,R740
- 嗅鞘细胞促损伤大鼠耳蜗螺旋神经节细胞保护和修复作用的实验研究,R764
- 大型听神经瘤术中面神经功能保护及预后判断,R739.4
- 脑干病变51例显微外科手术和临床分析,R739.4
- 神经电生理联合监测在颅内动脉瘤术中的应用,R743.3
- PBR在PCPA致失眠大鼠脑干中的表达,R740
- 失眠症的不同医师辩证论治随机对照评价方法研究,R256.23
- 于世家教授治疗消渴不寐经验荟萃,R249
- 中医药、针灸治疗抑郁性失眠的Meta分析,R256.23
- 耳穴压籽结合宁神益眠汤治疗失眠的临床观察,R256.23
- 清心滋水胶囊治疗原发性慢性失眠(阴虚火旺证)的临床研究,R256.23
- 子午流注纳支法治疗失眠的临床研究,R246
- 新生儿高胆红素血症对听力的影响,R722.1
- 开放桥小脑角池对脑干听觉诱发电位的影响,R651.1
- 基于文献的失眠证中医证素组合规律研究,R256.2
- 安神汤治疗更年期心肾不交型失眠的临床研究,R256.23
- 失眠症惊悸不安状态评定量表的研制及与人格的相关性研究,R256.23
- 失眠症中医证候与个性特征及心理状态的相关性研究,R256.23
- “龙虎交战”针法为主治疗肝郁气滞型失眠症的临床研究,R246
- 产前应激大鼠子代耳蜗核GR、SR-1A改变与听力损伤的实验研究,R764
中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|