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Cofilin-1在肺腺癌中的表达与顺铂耐药的关系

作　者: 杨丁懿
导　师: 姜武忠；魏瑞
学　校: 中南大学
专　业: 肿瘤学
关键词: cofilin-1 肺腺癌顺铂耐药 Western blot 免疫组织化学
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 42次
引　用: 1次
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内容摘要

目的：研究cofilin-1的表达情况与肺腺癌顺铂耐药的关系,探讨cofilin-1的高表达导致顺铂耐药的可能机制,找寻逆转顺铂耐药的作用靶点。方法：选用人肺腺癌A549细胞系及A549/DDP耐药细胞系,用一定浓度顺铂培养A549/DDP细胞,形成肺腺癌耐药模型。培养细胞至对数生长期(约80%),充分裂解细胞,提取细胞总蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,半干法转到PVDF膜上,用1%的BSA(TBST配制)封闭4-6小时,cofilin-1一抗冰箱孵育过夜(1：800稀释),TBS冲洗后辣根过氧化物酶标记的二抗37℃孵育3-4小时,TBS洗涤后ECL法显影,洗片,选用β-actin作为内参(1：10000稀释)。对重复三次得到的Western blot结果进行灰度值分析,以β-actin为内参对照,应用统计软件SPSS 13.0进行统计学分析,确定P<0.05为差异有显著意义。选择中南大学湘雅医院1999-2008年经病理证实的肺腺癌患者活检组织蜡块包埋标本,按照1979年WHO制定的实体肿瘤客观疗效评定标准,分为化疗敏感组(CR+PR)20例,化疗耐药组(PD)20例。入选标准：坚持以铂类为主的化疗方案治疗4周期以上,此间未接受过手术治疗,有完整的病历资料。活检标本常规石蜡切片(4μm),按SP免疫组化试剂盒说明完成cofilin-1蛋白的免疫组织化学检测,用PBS代替一抗作为阴性对照,以正常上皮组织阳性切片作为阳性对照。以细胞浆内和(或)细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。应用统计软件SPSS 13.0进行统计学分析,确定P<0.05为差异有显著意义。结果：采用Western blot成功检测到人肺腺癌A549细胞及A549/DDP细胞中cofilin-1蛋白的表达情况,并进行半定量分析。三次Western blot的条带均显示,A549/DDP细胞中cofilin-1蛋白含量明显多于A549细胞。分析所得蛋白条带灰度值,P<0.0005,两者差异具有统计学意义。利用免疫组织化学方法分析了cofilin-1蛋白在20例顺铂耐药肺腺癌患者活检组织标本及20例顺铂敏感肺腺癌患者活检组织标本中的表达水平。Cofilin-1蛋白阳性信号可定位于细胞膜、细胞浆及细胞核；cofilin-1蛋白在肺腺癌患者活检组织标本中的阳性表达率为100%,在耐药组弱阳性(+)1例,阳性(++)6例,强阳性(+++)13例；在敏感组弱阳性(+)4例,阳性(++)11例,强阳性(+++)5例；耐药组cofilin-1蛋白表达的阳性程度远高于敏感组,P<0.0005,两组表达差异具有统计学意义。结论：①顺铂耐药肺腺癌中cofilin-1蛋白呈高表达；②cofilin-1蛋白与肺腺癌顺铂耐药密切相关；③cofilin-1蛋白可能成为逆转顺铂耐药的作用靶点。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
英文缩写  10-11
前言  11-14
第一章 Cofilin-1在人肺腺癌A549及A549/DDP细胞中表达情况的研究  14-24
  1 引言  14-15
  2 材料与方法  15-22
    2.1 实验材料  15-16
    2.2 实验方法  16-21
    2.3 统计方法  21-22
  3 结果  22-24
第二章 Cofilin-1在顺铂耐药肺腺癌患者活检标本及顺铂敏感肺腺癌患者活检标本中表达情况的研究  24-29
  1 引言  24
  2 材料与方法  24-26
    2.1 实验材料  24-25
    2.2 实验方法  25-26
    2.3 结果判断  26
  3 结果  26-29
讨论  29-31
结论  31-32
参考文献  32-35
综述 Cofilin信号通路在肿瘤侵袭和转移中的作用  35-52
致谢  52

Cofilin-1在肺腺癌中的表达与顺铂耐药的关系

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