学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

应用四环素调控系统建立可诱导的真核表达体系

作　者: 张小男
导　师: 陈珊；陈惠鹏
学　校: 东北师范大学
专　业: 微生物
关键词: tTS/tet-on 严谨性调控细胞模型稳定表达
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 90次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

基因表达的调控是分子生物学研究的一个重要问题。特别是在转录水平,其调控是一个非常复杂的过程。目前存在的一些问题给基因的表达和调控研究造成了困难,如一些基因的持续表达则接近细胞毒水平会造成细胞的死亡、毒性基因功能研究缺少精准的调控系统,以及以生产毒性蛋白为目标的工程化细胞株的构建难等问题。因此构建一种严谨、高效以及可诱导调控的基因表达调控系统,可人为控制外源基因的表达水平,有利于模拟该基因在生理、病理等不同状态下的作用特点和机制。利用这种可诱导的调控系统可以用于定量调控基因表达以及进行毒性基因功能分析等方面的研究。目前所有的真核基因表达调控系统中四环素调控系统(tet systerm)被认为是目前最为理想的真核生物基因表达调控系统。其中四环素调控系统中tTS/tet-on调控系统应用最为广泛,该系统的组成为:两个调控蛋白(tTS,rtTA)和一个四环素反应表达框(TRE),该系统的诱导物为四环素(Tc)或其衍生物强力霉素(Dox)。两种调控蛋白的联合使用不仅不会影响该系统的诱导能力,对其基础表达水平也能大大降低,现已经广泛应用于构建各种细胞模型以研究目的基因的功能之中。本研究利用新型tTS/tet-on调控表达载体,选择CHO-K1为宿主细胞,构建并筛选出稳定的tTS/tet-on细胞株。通过Real-time PCR和双萤光素酶报告基因检测系统对筛选出的tTS/tet-on调控表达细胞株的调控性能进行测定和比较。Real-time PCR结果及萤光素酶测定数据表明,筛选出的tTS/tet-on调控表达细胞株更为严谨和高效,取得了较好的实验结果。在此基础之上,利用筛选出的tTS/tet-on调控表达细胞株,进行病毒2A蛋白酶基因的表达调控研究,证明严谨型tTS/tet-on调控表达细胞株可以实现对毒性蛋白的调控表达。本研究成功构建并筛选出两株严谨型tTS/tet-on调控表达细胞株,其较低的基础表达活性及较强的诱导能力为进行外源性兴趣基因在真核细胞中的调控表达提供了一个技术平台。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
引言  8-13
  1. 基因表达调控系统的研究  8-9
  2. 依赖于四环素调控的基因表达系统  9-11
    2.1 tet调控系统的组成  9
    2.2 tet调控系统的调节形式  9-10
    2.3 tet-on/tet-off比较  10
    2.4 tet-on系统的研究进展  10-11
    2.5 tet-on细胞模型  11
  3. 本课题拟解决的问题及采用策略  11-13
第一章建立快速筛选严谨型tTs/tet-on细胞株方案  13-23
  1. 材料  14
  2. 方法  14-16
  3. 结果  16-21
  4. 讨论  21-22
  5. 小结  22-23
第二章 tTS/tet-on细胞株性能的测定与比较  23-32
  1. 材料  23
  2. 方法  23-25
  3. 结果  25-30
  4. 讨论  30
  5. 小结  30-32
第三章利用tTS/tet-on细胞株调控合成毒性蛋白  32-45
  1. 材料  32-33
  2. 方法  33-35
  3. 结果  35-44
  4. 讨论  44
  5. 小结  44-45
结论  45-47
参考文献  47-49
附录  49-52
后记  52

应用四环素调控系统建立可诱导的真核表达体系

内容摘要

全文目录

相似论文