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UVB辐射对人成纤维细胞TET2基因表达的影响

作　者: 谭姗姗
导　师: 陈静
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: UVB TET2 光老化 成纤维细胞
分类号: R751
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 14次
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内容摘要


目的：1.观察UVB干预对体外培养人成纤维细胞增殖活力的影响。2.观察UBV干预对体外培养人成纤维细胞TET2基因表达的影响。方法：1.取体外培养的原代人成纤维细胞,用不同剂量UVB照射成纤维细胞。2.亚毒性剂量UVB累积五次照射成纤维细胞后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测照射组及对照组细胞的增殖活力。3.用不同累积剂量UVB照射干预各组成纤维细胞后,用real time-PCR法检测各组成纤维细胞的羟甲基化相关基因TET2的表达情况。4.用不同累积剂量UVB照射干预各组成纤维细胞后,用Western-Blot法检测TET2蛋白的含量。结果：1.用每日10mJ/cm2,累积照射剂量50mJ/cm2的UVB辐射干预体外培养的人成纤维细胞后,取经干预的细胞接种培养,同时接种未经干预的细胞作为对照组,把细胞爬壁时间设为Oh时间点,在0h、24h、48h、72h及96h时间点用MTT法检测细胞增殖活性,与对照组相比,在同一时间点经干预的细胞吸光度明显小于对照组,增殖活力低,在Oh时间点无统计学意义(p<0.05),在24h、48h、72h、96h时间点差别均具有统计学意义(p<0.05)2.根据累积UVB照射剂量进行分组,同时设未经照射成纤维细胞为对照组。当用每日10mJ/cm2UVB照射体外培养的人成纤维细胞后,随UVB累积剂量的增加,TET2mRNA水平先升高,在第二天(累积剂量20mJ/cm2)时达到高峰,随后TET2mRNA水平出现回落,但均维持在较高水平,与对照组相比,累积UVB辐射量为20mJ/cm2、30mJ/cm2、40mJ/cm2、50mJ/cm2组TET2mRNA的增加量具有统计学意义(p<0.05), UVB辐射量为10mJ/cm2组的人成纤维细胞中TET2mRNA与空白对照组相比无统计学差异(p>0.05)。3.根据RT-PCR的检测结果,选取具有统计学意义的组别进行TET2蛋白含量的检测,用Werstern-Blot法检测对照组及UVB累积辐射量为20mJ/cm、30mJ/cm、40mJ/cm2、50mJ/cm2的处理组,随累积照射量的增加,TET2蛋白水平先呈上升趋势,在20mJ/cm2组最大,随后逐渐下降,UVB累积辐射量为20mJ/cm2、30mJ/cm2的处理组与对照组相比TET2蛋白表达的水平增加有统计学意义(p<0.05),UVB累积辐射量为40mJ/cm2、50mJ/cm2的处理组TET2蛋白水平较对照组增加,但无统计学意义(p>0.05)。结论：1.用亚毒性剂量UVB每次10mJ/cm2,共五次干预体外培养的人成纤维细胞后,细胞的增殖活力与对照组相比明显降低,细胞呈现老化状态。2.用适宜剂量UVB干预体外培养的人成纤维细胞后,TET2表达增加,UVB照射可诱导TET2基因的表达,去甲基化作用为光老化发生的机制之一。图11幅,表3个,参考文献37篇。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
符号说明  10-11
1 前言  11-14
2 材料和方法  14-26
  2.1 主要仪器及试剂  14-17
    2.1.1 主要仪器  14
    2.1.2 主要试剂及耗材  14-15
    2.1.3 主要相关试剂配制  15-17
  2.2 实验方法及步骤  17-25
    2.2.1 细胞培养  17-19
    2.2.2 UVB照射  19
    2.2.3 MTT法检测UVB对成纤维细胞增殖活力的影响  19-20
    2.2.4 实时荧光定量PCR(REAL-TIME PCR)检测成纤维细胞TET2MRNA的表达  20-23
    2.2.5 WESTERN-BLOT检测成纤维细胞中TET2蛋白的表达水平  23-25
  2.3 统计学方法  25-26
3 结果  26-32
  3.1 UVB对成纤维细胞形态的影响  26
  3.2 MTT法检测UVB对成纤维细胞增殖活性的影响  26-27
  3.3 实时荧光定量PCR(REAL-TIME PCR)检测细胞中TET2MRNA的表达情况  27-30
    3.3.1 细胞RNA样品的质检  27
    3.3.2 UVB对成纤维细胞TET2基因表达时效性的影响  27-30
    3.3.3 UVB照射干预对成纤维细TET2蛋白表达的影响  30
  3.4 WESTERN-BLOT法检测经UVB光照处理后成纤维细胞内TET2蛋白的水平  30-32
4 讨论  32-35
5 结论  35-36
参考文献  36-39
综述  39-48
  参考文献  44-48
致谢  48

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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学
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