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胸腺素β4对体外培养的人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转分化的影响

作　者: 廖艳芬
导　师: 曹阳
学　校: 华中科技大学
专　业: 眼科学
关键词: 胸腺素β4 后发性白内障晶状体上皮细胞增殖迁移上皮间质转分化
分类号: R776.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：后囊混浊（Posteriorcapsuleopaciftcation，PCO）主要由术后残留的晶状体上皮细胞（lensepithelialcells，LECs）的增殖、迁移及上皮间质转分化（epithelial–mesenchymaltransition，EMT）引起。胸腺素β4（thymosinβ4，Tβ4）是一种重要的肌动蛋白耦联蛋白，参与介导多种生物学反应。本实验通过研究Tβ4对体外培养的人晶体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转分化的影响，探讨Tβ4在PCO防治中的可能作用。方法1.用MTT法检测Tβ4对LECs增殖的影响。用含不同浓度Tβ4（0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）无血清培养基处理LECs，分别于24h、48h、72h行MTT检测，测量OD值。2.细胞划痕实验及Transwell小室迁移模型观察Tβ4对LECs迁移的影响。（1）划痕后细胞培养基中加入不同浓度Tβ4（0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）的0.1%牛血清白蛋白DMEM培养基，分别于划痕后0h、24h、48h选取10个随机视野拍照记录划痕间距（前后拍照位置须一致），比较不同时间点不同浓度的平均迁移距离。（2）种细胞于上室，下室为不同浓度Tβ4（0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）的20%胎牛血清DMEM培养基，作用24h后比较不同浓度穿过小室的平均细胞数目。3.实时定量PCR技术比较处理72h后Tβ4处理组和正常对照组中E-钙粘蛋白及α-SMAmRNA表达水平的变化以检测Tβ4对LECs的转分化作用的影响。结果1.与对照组相比，当浓度为100ng/ml、1000ng/ml时Tβ4能够明显促进LECs的增殖，差异有显著性（P<0．05）。相同药物浓度组随着作用时间的延长促进作用加强，各时间点相互比较差异亦有显著性（P<0．05）。2.24h各浓度组（0¹000ng/ml）平均迁移距离分别为：329.6621±47.43715μm,354.2761±52.5730μm,453.5897±46.3792μm,499.6127±46.0270μm,555.4763±71.6129μm;48h各浓度组（0¹000ng/ml）平均迁移距离为：614.6647±97.2274μm,636.1453±649.7268μm,720.5249±41.9510μm,739.9166±85.3627μm,770.9152±62.3144μm。10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml处理组相对于对照组而言，差异有统计学意义（P＜0.05），且细胞迁移距离随时间和浓度递增。Tβ4处理24h后，穿过小室的细胞数各组（0¹000ng/ml）分别为82±3个,109±6个,128±10个，163±5个,204±11个。10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml处理组相对于对照组而言，差异有统计学意义（P＜0.05），且细胞迁移能力随浓度递增。3.Tβ₄加药处理72h后LECs表达α-SMA、E-钙粘蛋白mRNA水平的变化：加药处理后，α-SMA表达量升高（151.7±5.0）%，E-钙粘蛋白表达量下降（68.0±8.1）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：胸腺素β4可促进人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转分化，其在PCO防治中的可能作用值得作进一步研究。

全文目录

英文缩略词对照表  5-6
摘要  6-8
Abstract  8-11
引言  11-13
实验材料和方法  13-22
实验结果  22-25
讨论  25-29
参考文献  29-33
综述  33-48
  参考文献  41-48
致谢  48

胸腺素β4对体外培养的人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转分化的影响

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