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P53磷酸化与鼻咽癌放射敏感性的相关性研究

作　者: 李玲玉
导　师: 申良方
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: P53磷酸化鼻咽癌放射敏感性放射抵抗预后
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：建立鼻咽癌HNE2放射不敏感细胞系,即HNE2-NRC,研究HNE2-NRC与HNE2细胞系中P53磷酸化的差异性表达,并在鼻咽部组织芯片中检测P53Ser376位点磷酸化水平,探讨P53蛋白磷酸化与鼻咽癌治疗反应的关系。方法：通过亚致死射线剂量、递增射线剂量反复照射人鼻咽癌细胞株HNE2的方法建立放射不敏感细胞株HNE2-NRC以HNE2-NRC及HNE2为研究对象,观察不同的放射剂量照射前后细胞形态、细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的变化。倒置显微镜下观察细胞形态的变化,克隆形成实验观察细胞克隆形成率及生长曲线、MTS法测定放射线照射后细胞增殖抑制。流式细胞术检测HNE2-NRC及HNE2细胞周期的差异。Western Blotting测定HNE2-NRC与HNE2细胞系中P53磷酸化的差异性表达,免疫组化法检测鼻咽部组织芯片中P53Ser376位点磷酸化水平。结果：克隆形成实验表明HNE2-NRC较HNE2克隆形成力强,放疗增敏比SER为0.796<1。MTS实验检测到HNE2与HNE2-NRC相比,生长受到抑制,在6h、2d、6d、8d时差别均有统计学意义。流式细胞检测两株细胞周期具有差异,HNE2G2/M期细胞比率为23.88%,而HNE2-NRC G2/M期细胞比率为10.84%,且HNE2-NRC G0/G1期细胞比率增加。Western Blot结果显示HNE2-NRC与HNE2相比,P53、P53Ser15、Thr81、Thr55、 Ser389磷酸化水平升高,而Ser6、Ser9、Ser315、Ser376磷酸化水平降低。免疫组化染色检测鼻咽部组织芯片中P53Ser376表达,放疗后生存期<5年的患者与放疗后生存期>5年的患者相比较,P53Ser376磷酸化水平有降低的趋势。结论：1、本研究建立了放射不敏感细胞系HNE2-NRC,与亲本细胞HNE2相比,具有耐放射的生长特性。2、在HNE2-NRC细胞中,P53Serl5、Thr55磷酸化水平升高；而P53Ser315、Ser376发生去磷酸化,提示P53相关位点的磷酸化特征谱与鼻咽癌放射抵抗相关。3、在组织芯片水平,P53Ser376磷酸化水平与放射治疗的鼻咽癌病人预后呈一定的相关性,进一步提示P53磷酸化谱作为放疗敏感性预测的可能性。图10幅,表4个,参考文献124篇。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
英文缩略  10-11
第一章前言  11-15
第二章材料与方法  15-23
  2.1 实验材料  15
  2.2 主要实验仪器  15-16
  2.3 药物、试剂  16-18
  2.4 实验方法  18-23
第三章结果  23-32
  3.1 建立鼻咽癌HNE2放疗不敏感细胞系  23-25
  3.2 鼻咽癌HNE2放疗不敏感细胞系细胞生物学研究  25-28
  3.3 鼻咽癌HNE2放疗不敏感细胞系中P53磷酸化状态的特征  28-30
  3.4 P53 S376磷酸化状态与鼻咽癌临床预后的相关研究  30-32
第四章讨论  32-37
  4.1 两种方法建立鼻咽癌放疗不敏感细胞HNE2-NRC  32-33
  4.2 P53水平与鼻咽癌放疗敏感性相关性  33
  4.3 P53磷酸化水平与鼻咽癌放疗敏感性相关性  33-37
第五章结论  37-38
参考文献  38-43
综述  43-55
  参考文献  49-55
致谢  55

P53磷酸化与鼻咽癌放射敏感性的相关性研究

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