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HBx和HBs通过转录因子Ets-1上调RhoC基因的表达

作　者: 秦栋栋
导　师: 汤华
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: HBx HBs Ets-1 RhoC Promoter
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的探讨HBV上调RhoC表达的分子机制，揭示一种新的HBV导致HCC侵袭的机制，为HCC治疗提供一种新的方法。方法1.生物信息学方法分析RhoC启动子5’启动子序列，找到与RhoC启动子序列高度结合的转录因子。2.构建RhoC启动子双荧光素酶报告质粒、转录因子干扰及过表达质粒。将RhoC启动子荧光素酶报告质粒分别与转录因子表达或干扰质粒共同转染入SMMC-7721细胞中，检测RhoC启动子的相对活性；提取细胞总RNA和蛋白质，qRT-PCR和Western blot方法检测转录因子和RhoC基因的表达差异。3. RT-PCR和Western blot方法检测转录因子在HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中的表达差异。构建过表达HBV的腺病毒并验证其正确表达。在Ad-HBV感染HepG2细胞中，用RT-PCR,qRT-PCR和Western blot方法检测转录因子的表达差异。4.分别构建HBV四种蛋白的表达质粒，将表达质粒转染入SMMC-7721细胞中，用RT-PCR和qRT-PCR方法检测转录因子的表达差异，找到对转录因子起调节作用的蛋白。构建起调节作用蛋白的干扰质粒，转染入HepG2.2.15细胞中，用RT-PCR,qRT-PCR和Western blot方法检测干扰质粒干扰效果，验证转录因子及RhoC的表达差异。结果1.软件预测分析结果显示与RhoC启动子高度结合的转录因子有Ets-1、NF-κB、SP1、AP-2α、YY1等。2.三种质粒均构建成功。共转染分析结果显示，转录因子Ets-1能明显增强RhoC启动子活性、mRNA及蛋白水平表达，其它几个转录因子与对照组比较均无明显差异，确定转录因子Ets-1做进一步的研究。3. HepG2.2.15细胞较HepG2细胞中转录因子Ets-1mRNA及蛋白水平显著上调；瞬时感染HBV腺病毒的HepG2细胞较HepG2细胞中转录因子Ets-1mRNA及蛋白水平显著上调。4.过表达HBV的四种蛋白，只有X及S蛋白能明显增加转录因子Ets-1的表达。在HepG2.2.15细胞中分别抑制X及S蛋白表达后，转录因子Ets-1及RhoC的表达水平显著下降。结论转录因子Ets-1可以上调RhoC的表达；HBV的X及S蛋白可以通过上调转录因子Ets-1的表达进而上调RhoC的表达。该研究为进一步揭示HBV诱导的HCC提供一种新的分子机制和治疗靶点。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-15
  参考文献  13-15
第一部分 RhoC 启动子序列转录因子分布分析  15-18
  1 材料与方法  15
  2 结果  15-16
  3 讨论  16-18
第二部分 转录因子调节 RhoC 启动子活性与表达水平作用验证  18-33
  1 材料与方法  18-28
  2 结果  28-31
  3 讨论  31-32
  参考文献  32-33
第三部分 HBV 对转录因子调控作用验证  33-39
  1 材料与方法  33-35
  2 结果  35-38
  3 讨论  38
  参考文献  38-39
第四部分 HBV 四种蛋白对转录因子调控作用验证  39-46
  1 材料与方法  39-41
  2 结果  41-44
  3 讨论  44-45
  参考文献  45-46
全文总结  46-49
  参考文献  47-49
文献综述  49-53
  参考文献  51-53
致谢  53-54
攻读硕士学位期间发表的学术论文  54-55

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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