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食管腺癌患者血液中外排小体微小RNA的研究

作　者: 王哲
导　师: 刘俊峰
学　校: 河北医科大学
专　业: 外科学
关键词: 食管腺癌外排小体微小RNA 肿瘤标记物
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

背景：食管癌是食管的常见疾病，也是一种常见的肿瘤。在全世界范围内，食管癌造成的死亡人数占所有癌症死亡人数的第六位。食管癌的主要病理类型包括鳞状细胞癌和腺癌。食管鳞状细胞癌在亚洲国家高发，从伊朗北部，到中亚，再到中国北部的这一区域被称为“亚洲带”，在这一地区，食管鳞状细胞癌的发病率高达十万分之一百。在西方国家，尽管鳞状细胞癌也是食管癌的主要病理类型，但食管腺癌的发病率在逐年上升。在某些国家例如丹麦，苏格兰，食管腺癌的发病率已经超过了食管鳞状细胞癌。在中国，随着人民生活水平的提高，饮食和生活习惯的改变，肥胖人群的增加，鳞状细胞癌的发病率逐渐下降，而食管腺癌的发病率却逐渐增高，呈现出与西方国家相似的趋势。因此，如何早期诊断食管腺癌，已成为医疗工作者们十分重要的任务。近年来关于外排小体的研究，为解决食管腺癌早期诊断的问题提供了一个方向。外排小体是一种广泛存在于各种动植物体内的囊泡状结构。上世纪80年代，科学家在血液中首次注意到了这种物质，证明它是一种之前没有见过的新结构后将其命名为“外排小体”。外排小体来源于细胞内的多泡囊状体，是细胞向周围环境排出无用蛋白、向其他细胞传递自身结构（如蛋白质，RNA等）的重要途径之一。外排小体在细胞间的联系发挥着重要的作用，随着研究的深入，其生理功能也被逐渐揭开。外排小体内含多种组成成分，包括蛋白质、脂质和RNA等。近年来，关于外排小体中微小RNA作为一类潜在肿瘤标记物的研究逐渐深入，在多种肿瘤如肺癌、卵巢腺癌等均发现，患者血液中外排小体的微小RNA可能作为其相应的肿瘤标记物，对早期诊断肿瘤有着巨大的意义。方法：收集食管腺癌患者10例，非癌症患者10例。由于食管腺癌发病人群具有显著的性别差异，男性发病率远远高于女性，因此本研究中所有食管腺癌病人和非癌症病人均选取男性。在选择病人时选取癌症分期较晚（约中晚期或晚期）的患者，以更好地体现癌症和非癌症患者血液外排小体中微小RNA谱的差异。为使两组病人年龄不仅均值相似，年龄分布也匹配，做年龄分布图以进行选择。签署知情同意书后采集癌症病人和非癌症人群的血液标本，为减少血细胞等物质的干扰，将血液标本分离为血清和血浆后分别提取血清、血浆外排小体，使用NanoSight和电子显微镜对外排小体进行计数和观察；随后从这些外排小体中提取总RNA，使用OpenArray对总RNA中的微小RNA进行筛查，并采用Statminer,Graphpad Prism和Microsoft Excel等软件分析数据。在Statminer数据分析中采用LIMMA和2－ΔΔCt方法计算在癌症和非癌症人群的血清、血浆外排小体中表达具有显著性差异的微小RNA，在Excel验证分析中采用微小RNA相对表达量和管家基因标准化方法验证这些显著差异性表达的微小RNA，并使用Ingenuity Pathway Analysis对得到的显著差异性表达的微小RNA进行相关生理和细胞功能、生物学通路的查找，明确它们与肿瘤的关系。结果：经分析得到，在血清外排小体中提取的总RNA中，10个微小RNA在食管腺癌患者和非癌症人群中的表达具有显著性差异(P<0.05)：hsa-miR-a，hsa-miR-b，hsa-miR-c，hsa-miR-d，hsa-miR-e，hsa-miR-f，hsa-miR-g，h，hsa-miR-i，hsa-miR-j；在血浆外排小体提取的RNA中，16个微小RNA在食管腺癌患者和非癌症人群中的表达具有显著性差异（P<0.05）：k，l，has-miR-m，hsa-miR-n，hsa-miR-o，hsa-miR-p，hsa-miR-q，hsa-miR-r，hsa-miR-s，hsa-miR-t，hsa-miR-u，hsa-miR-v，hsa-miR-w，x，hsa-miR-i，hsa-mR-j。对这些微小RNA进行相关文献的分析表明它们与很多癌症相关的生理功能和细胞功能有关，包括：肿瘤形成、生长和增殖，细胞运动，细胞增殖和凋亡，胃肠系统疾病，细胞周期，肿瘤形态学，细胞间信息交换，RNA翻译后调节等等。结论：食管腺癌患者血液中外排小体的微小RNA是一组十分有潜力的候选肿瘤标记物，它们可能对于食管腺癌的早期诊断和大规模筛查提供帮助。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-9
材料与方法  9-14
结果  14-16
附图  16-18
附表  18-22
讨论  22-25
参考文献  25-28
综述外排小体的研究进展  28-47
  参考文献  38-47
致谢  47-48
个人简历  48

食管腺癌患者血液中外排小体微小RNA的研究

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